UVB辐射对人成纤维细胞TET2基因表达的影响

摘要

目的:1.观察UVB干预对体外培养人成纤维细胞增殖活力的影响。
　　2.观察UBV干预对体外培养人成纤维细胞TET2基因表达的影响。
　　方法:1.取体外培养的原代人成纤维细胞，用不同剂量UVB照射成纤维细胞。
　　2.亚毒性剂量UVB累积五次照射成纤维细胞后，用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测照射组及对照组细胞的增殖活力。
　　3.用不同累积剂量UVB照射干预各组成纤维细胞后，用realtime-PCR法检测各组成纤维细胞的羟甲基化相关基因TET2的表达情况。
　　4.用不同累积剂量UVB照射干预各组成纤维细胞后，用Westem-Blot法检测TET2蛋白的含量。
　　结果:1.用每日10 mJ/cm2，累积照射剂量50 mJ/cm2的UVB辐射干预体外培养的人成纤维细胞后，取经干预的细胞接种培养，同时接种未经干预的细胞作为对照组，把细胞爬壁时间设为0h时间点，在0h、24h、48h、72h及96h时间点用MTT法检测细胞增殖活性，与对照组相比，在同一时间点经干预的细胞吸光度明显小于对照组，增殖活力低，在0h时间点无统计学意义(p＞0.05)，在24h、48h、72h、96h时间点差别均具有统计学意义(p＜0.05)。
　　2.根据累积UVB照射剂量进行分组，同时设未经照射成纤维细胞为对照组。当用每日10 mJ/cm2UVB照射体外培养的人成纤维细胞后，随UVB累积剂量的增加，TET2 mRNA水平先升高，在第二天（累积剂量20 mJ/cm2）时达到高峰，随后TET2 mRNA水平出现回落，但均维持在较高水平，与对照组相比，累积UVB辐射量为20mJ/cm2、30 mJ/cm2、40 mJ/cm2、50 mJ/cm2组TET2 mRNA的增加量具有统计学意义(p＜0.05)，UVB辐射量为10 mJ/cm2组的人成纤维细胞中TET2 mRNA与空白对照组相比无统计学差异(p＞0.05)。
　　3.根据RT-PCR的检测结果，选取具有统计学意义的组别进行TET2蛋白含量的检测，用Werstern-Blot法检测对照组及UVB累积辐射量为20 mJ/cm2、30 mJ/cm2、40 mJ/cm2、50 mJ/cm2的处理组，随累积照射量的增加，TET2蛋白水平先呈上升趋势，在20 mJ/cm2组最大，随后逐渐下降，UVB累积辐射量为20 mJ/cm2、30 mJ/cm2的处理组与对照组相比TET2蛋白表达的水平增加有统计学意义(p＜0.05)，UVB累积辐射量为40 mJ/cm2、50 mJ/cm2的处理组TET2蛋白水平较对照组增加，但无统计学意义(p＞0.05)。
　　结论:1.用亚毒性剂量UVB每次10 mJ/cm2，共五次干预体外培养的人成纤维细胞后，细胞的增殖活力与对照组相比明显降低，细胞呈现老化状态。
　　2.用适宜剂量UVB干预体外培养的人成纤维细胞后，TET2表达增加，UVB照射可诱导TET2基因的表达，去甲基化作用为光老化发生的机制之一。