黑青稞籽皮提取物对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

摘要

目的:研究黑青稞籽皮提取物后处理对心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用及其机制。
　　方法:用Na2S2O4作耗氧剂建立H9c2细胞化学性缺氧/复氧损伤模型。将H9c2细胞随机分为5组:正常对照组（C组）、缺氧/复氧组（H/R组）、缺氧/复氧+低、中、高剂量提取物组（H/R+L、M、H组）。应用MTT法检测细胞相对活力，流式细胞术检测细胞凋亡、细胞内ROS水平和细胞线粒体跨膜电位（△Ψm），Western blot检测相关蛋白(Akt、pAkt、Bcl-2和Bax)表达变化。数据统计采用SAS9.2和SPSS19.0软件包进行统计学处理。
　　结果:1.通过将H9c2细胞置于5mM Na2S2O4中使细胞缺氧20min，再复氧8h建立了稳定、可靠的缺氧/复氧损伤模型。2.缺氧/复氧降低H9c2细胞相对活力，黑青稞籽皮提取物后处理能抑制缺氧/复氧所致细胞相对活力的下降。3.缺氧/复氧诱导H9c2细胞凋亡，黑青稞籽皮提取物后处理能抑制缺氧/复氧所致细胞凋亡。4.缺氧/复氧增加H9c2细胞内ROS水平，黑青稞籽皮提取物后处理能抑制缺氧/复氧所致细胞内ROS水平的增加。5.缺氧/复氧降低H9c2细胞线粒体跨膜电位，黑青稞籽皮提取物后处理能抑制缺氧/复氧所致细胞线粒体跨膜电位的下降。6.缺氧/复氧降低H9c2细胞pAkt、Bcl-2的表达，黑青稞籽皮提取物后处理能抑制缺氧/复氧所致细胞pAkt、Bcl-2表达的降低。各组细胞Akt、Bax的表达无明显差异。
　　结论:黑青稞籽皮提取物后处理对心肌细胞缺氧/复氧损伤具有保护作用，可能通过抑制缺氧/复氧所致细胞内ROS水平的增加，抑制细胞线粒体跨膜电位的下降，进而减少心肌细胞凋亡。其保护作用可能与激活PI3K/Akt/Bcl-2通路相关。

目录

声明

摘要

英文缩略词表

1 前言

2 心肌细胞缺氧／复氧模型的建立与评价

2．1 材料

2．1．1 细胞

2．1．2 主要试剂

2．1．3 主要仪器

2．1．4 主要试剂的配制

2．2 方法

2．2．1 H9c2细胞培养

2．2．2 心肌细胞缺氧／复氧损伤模型的建立

2．2．3 统计处理

2．3 结果

2．3．1 正常心肌细胞形态

2．3．2 心肌细胞缺氧／复氧损伤后形态学改变

2．3．3 心肌细胞缺氧／复氧损伤后细胞相对活力变化

2．3．4 心肌细胞缺氧／复氧损伤后细胞凋亡情况

2．4 讨论

3 黑青稞籽皮提取物对心肌细胞缺氧／复氧损伤的保护作用

3．1 材料

3．1．1 细胞

3．1．2 主要试剂

3．1．3 主要仪器

3．1．4 主要试剂的配制

3．2 方法

3．2．1 实验分组

3．2．2 MTT法检测提取物对正常心肌细胞相对活力的影响

3．2．3 各组细胞形态学变化

3．2．4 MTT法检测各组细胞相对活力

3．2．5 各组细胞凋亡情况

3．2．6 细胞内活性氧水平的变化

3．2．7 细胞线粒体跨膜电位(Δψm)的变化

3．2．8 Western blot方法检测细胞Akt，pAkt，Bcl-2和Bax表达水平的变化

3．2．9 统计处理

3．3 结果

3．3．1 提取物对正常心肌细胞相对活力的影响

3．3．2 各组细胞形态学变化

3．3．3 MTT法检测各组细胞相对活力

3．3．4 各组细胞凋亡情况

3．3．5 各组细胞内活性氧水平

3．3．6 各组细胞线粒体跨膜电位的比较

3．3．7 各组细胞Akt，pAkt，Bcl-2和Bax表达水平

3．4 讨论

4 结论

参考文献

综述 细胞缺氧／复氧模型研究进展

攻读学位期间主要的研究成果目录

致谢