靶向folr1的脱氧核酶DrzE增加鼻咽癌移植瘤对紫杉醇敏感性的研究

摘要

目的:
　　研究靶向folr1的脱氧核酶DrzE在动物体内转染后是否可以增加鼻咽癌裸鼠移植瘤体对紫杉醇的敏感性，并检测脱氧核酶使用前后鼻咽癌瘤体folr1的表达差异。
　　方法:
　　培养鼻咽癌细胞系CNE-1及其紫杉醇耐药细胞CNE-1/taxol，消化后调整细胞悬液浓度至1×107/ml。将细胞悬液注射至4只裸鼠皮下，待其成瘤直径达8mm后把瘤体切成小块，于另外36只裸鼠皮下移植小瘤块成瘤。瘤体直径再次达到5mm后，将其中32只裸鼠随机分为对照组、紫杉醇组、紫杉醇-脱氧核酶组、脱氧核酶组。分别用药后，观察靶向folr1的“10-23”型脱氧核酶DrzE、紫杉醇单独应用和两者联合应用对鼻咽癌移植瘤体的抑制情况，并研究DrzE能否增加瘤体对紫杉醇的敏感性。用药前后检测各组瘤体folr1的表达变化。统计学处理:数据以均数和标准差(M±SD)表示，统计学方法采用F检验及两样本t检验，P＜0.05认为差异有显著性。
　　结果:
　　1、细胞悬液接种法使裸鼠皮下成瘤，有潜伏期，耗时长，平均约45天成瘤，成瘤率低，约56％。新鲜组织块接种法无明显潜伏期，约14天成瘤，成瘤率为100％。
　　2、CNE-1瘤体较CNE-1/taxol瘤体生长速度快，给药前瘤体体积为80.13±24.50mm3，CNE-1/taxol瘤体体积为59.10±18.72mm3，差异有统计学意义(p＜0.05)。
　　3、单用紫杉醇对鼻咽癌CNE-1移植瘤体的生长有抑制作用，而对CNE-1/taxol耐药瘤体无抑制作用;单用脱氧核酶DrzE对亲本及耐药瘤体均有抑制作用，且对耐药瘤体的抑制作用显著与亲本瘤体;紫杉醇和脱氧核酶联合运用可相对于前两者，更能显著抑制移植瘤体的增长。
　　4、PCR法检测folr1表达的结果:给药前CNE-1/taxol移植瘤细胞中folr1的表达量为CNE-1表达量的12.47±0.49倍，给药后紫杉醇-脱氧核酶组、单用脱氧核酶组CNE-1及CNE-1/taxol移植瘤体folr1表达量均较对照组下降，差异有统计学意义(p＜0.05)。溶解曲线中β-actin、folr1均各只有一个波峰，提示产物特异性强，无杂质干扰。
　　结论:
　　1、鼻咽癌亲本移植瘤体较耐药瘤体生长快;
　　2、靶向folr1的脱氧核酶DrzE在裸鼠移植瘤体内转染成功后可降低肿瘤细胞增殖的速度;
　　3、靶向folr1的脱氧核酶DrzE可增加鼻咽癌耐药移植瘤体对紫杉醇的敏感性。

目录

声明

摘要

1 前言

2 材料与方法

2．1 实验材料

1．1．1 细胞株

2．1．2 主要实验仪器、设备

2．1．3 主要试剂及耗材

2．1．4 主要溶液的配置

2．1．5 动物

2．2 实验方法

2．2．1 人鼻咽癌细胞系CNE-1及其紫杉醇耐药系CNE-1／taxol的培养

2．2．2 荷瘤裸鼠模型的建立

2．2．3 脱氧核酶的准备

2．2．4 随机分组及给药治疗

2．2．5 移植瘤裸鼠实验指标观察及标本采集

2．2．6 荷瘤裸鼠实验数据计算

2．2．7 RT-PCR检测给药前后folr1的表达变化

2．3 统计学处理

3 结果

3．1 细胞悬液接种法裸鼠皮下移植瘤生长情况

3．2 新鲜瘤块移植法裸鼠皮下移植瘤的生长情况

3．3 各组裸鼠皮下鼻咽癌瘤体的生长情况

3．4 药物处理前后folr1表达的变化：RT-PCR法

4 讨论

4．1 裸鼠成瘤对鼻咽癌肿瘤耐药研究的重要性

4．2 鼻咽癌CNE-1细胞株裸鼠成瘤的特点

4．2．1 细胞悬液成瘤与新鲜瘤块成瘤比较

4．2．2 鼻咽癌移植瘤体生长速度比较

4．3 用药后各组移植瘤体抑制率对比

4．3．1 紫杉醇对CNE-1／taxol无明显抑制作用

4．3．2 单用靶向folr1的DrzE对CNE-1／taxol瘤体的抑制作用较大

4．3．2 靶向folr1的脱氧核酶可增加鼻咽癌细胞对紫杉醇的敏感性

4．4 DrzE在鼻咽癌移植瘤中的转染率较高，效果较好

5 结论

参考文献

综述 10-23型脱氧核酶的研究进展

攻读学位期间主要的研究成果

致谢