肌酐、尿酸干化学检测试纸条的临床应用研究

摘要

目的：
　　在原肌酐、尿酸酶法试剂盒中添加新色原物质TBHBA，提高肌酐、尿酸酶学检测方法的灵敏度，在其理论基础支持下研究出一种具有自主知识产权的，高度灵敏的、快速检测肌酐、尿酸干化学试纸条，为临床监测肾功能水平，尤其是对家庭监测慢性肾病(CKD)患者肾功能的变化和终末期肾病(ESRD)患者透析效果的判断提供一种简便、快捷定量/半定量的可靠的检测手段。
　　方法：
　　1.建立高灵敏度新色原酶学检测方法:选择高纯度的新色原2，4，6-三溴-3-羟基苯甲酸(TBHBA)添加到肌酐、尿酸检测试剂盒的R1试剂中，混匀后作为新色原试剂。通过全波段扫描检测新色原试剂的最佳比色波长;根据浓度-吸光度曲线选择TBHBA的最佳浓度;通过对比试验确定新方法试剂比例和最佳样品量;采用最佳检测参数，评估新色原检测方法的的各项性能，确定TBHBA对提高检测灵敏度的可行性提供依据。
　　2.试纸条的制作:首先微孔反应板上进行大量湿化学试验，探索纸片反应体系的最佳条件参数;配制滤纸浸渍液，手工制作肌酐、尿酸酶促检测试纸条。
　　3.标准比色卡的制作:在微孔反应板上进行湿化学实验，根据一系列样本标准液反应后的颜色深浅梯度，制作试纸条结果判读的标准比色卡。
　　4.试纸条的评价:检测已知浓度的标准品和临床血清标本，对比全自动分析仪测定的肌酐、尿酸浓度，分析自制试纸条检测结果的精准性，评价自制肌酐、尿酸试纸条的临床应用价值。
　　结果：
　　1.高灵敏度肌酐、尿酸检测新方法的参数分别为:检测波长为520nm、510nm，TBHBA浓度为3g/L、5g/L，最大样本添加量为20μL15μL，最佳试剂比例为3∶1、4∶1。
　　2.肌酐、尿酸酶学新方法线性回归方程分别为y=0.0006x+0.0165、y=0.0009x-0.0209。线性范围分别为12.5μmol/L～1000μmol/L、40μmol/L～1600μmol/L，该范围涵盖了正常人和肾病患者的肌酐、尿酸水平，满足临床检测需要。新方法检测反应显色能稳定2小时，肌酐和尿酸高、低值标准品的CV值分别是2.02％、4.13％和3.25％、2.86％。新色原试剂4℃能保存2个月。新色原方法与原试剂盒比较，灵敏度分别是原方法的2倍和1.5倍。
　　3.研发制作了肌酐、尿酸检测试纸条和标准比色卡;试纸条制作过程中浸渍时间为10秒，试纸条检测样本量为15μL，检测结果最佳终点观察时间为20～30min;临床血清标本检测，试纸条检测分组的血清样本生化检测，浓度均值和中位数均在试纸条设置的理论区间内，自制试纸条半定量结果与全自动生化仪测定浓度基本符合。
　　结论：
　　1.选择以TBHBA为色原能有效提高肌酐、尿酸酶学检测方法的灵敏度，为肌酐、尿酸干化学检测试纸条的研究提供可靠依据。
　　2.肌酐、尿酸干化学检测试纸条测定结果准确、可靠，重复性好，可半定量/定量检测到肌酐、尿酸低浓度水平的样本，理论上支持唾液样本肌酐、尿酸的检测。
　　3.肌酐、尿酸干化学检测试纸条携带方便、检测快捷，为临床监测肾功能水平、尤其是家庭CKD患者的肾功能监测和ESRD透析效果的判断具有重要临床意义。
　　4.自主研发的肌酐、尿酸酶促干化学检测试纸条有较好的应用前景和市场开发价值。

目录

声明

摘要

英文缩略词

前言

第一章 建立高灵敏度肌酐、尿酸酶学方法

1 材料与原理

1．1 主要试剂

1．2 主要仪器

1．3 溶液配制

1．4 检测原理

2 方法

2．1 工作液的配制

2．2 新色原检测方法的建立

2．3 新色原检测方法的性能评价

2．4 统计学方法

3 结果

3．1 新色原检测方法最佳参数选择

3．2 新色原检测方法的性能评价

4 讨论

5 小结

第二章 肌酐、尿酸干化学检测试纸条的实验研究

1 材料

1．1 主要试剂

1．2 主要仪器

2 方法

2．1 基础湿化学试验

2．2 酶促干试纸的研制

2．3 样品测试

2．4 自制试纸条性能评价

2．5 统计学方法

3 结果

3．1 湿化学实验

3．2 酶促干试纸条的参数

3．3 两方法的比较

4 讨论

5 小结

全文总结

参考文献

综述 干化学分析在检验医学中的应用

攻读学位期间主要研究成果目录

致谢