分娩启动中NF-κB与AP-1易位及NMB对其的影响

摘要

目的:
　　1、探讨NMB介导的NF-κB及AP-1的表达量变化和相关性与分娩启动的关系。
　　2、研究子宫下段平滑肌细胞中NMB介导的NF-κB及AP-1发生细胞内易位与分娩启动的关系。
　　方法:
　　1、组织块贴壁法原代培养人妊娠晚期子宫下段平滑肌细胞，采用免疫细胞化学方法进行鉴定。
　　2、临产前后子宫下段平滑肌组织采用石蜡包埋固定，采用苏木精-伊红染色方法进行切片质量检测。
　　3、采用免疫组织化学方法对自然临产前后子宫下段平滑肌细胞中NF-κ B及AP-1表达进行测定。
　　4、采用免疫细胞荧光对NMB诱导前后子宫下段平滑肌细胞中NF-κ B(p65)及AP-1(c-Jun)表达进行测定，并通过多重免疫荧光染色进行NF-κ B及AP-1的细胞内共定位。
　　5、采用Image-Pro Plus6.0软件进行NF-κB及AP-1表达的累积光密度值(IOD)测定，采用SPSS19.0软件分析NF-κ B及AP-1表达的差异及相关性。
　　结果:
　　1、组织块贴壁法培养的原代子宫平滑肌细胞生长状态良好，经免疫细胞化学法α-SMA鉴定及NMBR检测，细胞纯度近100％，说明培养的细胞是表达NMBR的子宫平滑肌细胞。
　　2、组织经石蜡包埋固定，行HE染色检测。子宫下段平滑肌细胞结构清晰，说明组织固定包埋方法可行，组织切片适于进行免疫组织化学染色检测。
　　3、自然临产前后子宫下段平滑肌细胞中p65、c-Jun定位:未临产组p65与c-Jun主要位于细胞浆，临产组p65与c-Jun主要位于细胞核。并且临产组与来临产组p65、c-Jun表达量存在差异，临产组p65及c-Jun表达量高于未临产组，差异具有统计学意义，P＜0.05。
　　4、自然临产前后子宫平滑肌细胞中p65与c-Jun表达量Pearson相关性分析:未临产组及临床组的p65及c-Jun表达均存在正相关，相关系数分别为0.659、0.879, p＜0.05。
　　5、NMB诱导前后p65、c-Jun定位:未加NMB的对照组位于细胞浆;NMB4h组主要位于核膜周边区域;NMB8h组主要位于细胞核，细胞浆呈低表达。
　　6、NMB诱导前后的p65、c-Jun表达:NMB8h组IOD值明显高于对照组及NMB4h组，差异具有统计学意义，P＜0.05; NMB4h组与对照组之间差异无统计学意义，p＞0.05。
　　7、p65与c-Jun共定位:对照组、NMB4h组、NMB8h组，多重免疫荧光染色显示二者在细胞内表达部位一致，NMB诱导前二者主要位于细胞浆，NMB诱导后8小时二者主要位于细胞核，表达部位几乎完全重叠。
　　8、NMB诱导的p65与c-Jun表达量Pearson相关性分析:对照组、NMB4h组、NMB8h组中，p65与c-Jun均呈正相关，相关系数分别为0.587、0.653、0.874，P＜0.05。
　　结论:
　　1.分娩启动前，NF-κB及AP-1定位于细胞浆，分娩启动后NF-κB及AP-1迁移进入细胞核。
　　2.NMB可同时诱导NF-κB及AP-1易位，二者定位及迁移方向呈同步变化，表达量同时增高，推测NF-κB与AP-1可能存在协同作用。

目录

声明

摘要

缩略语表

前言

2 材料与方法

2．1 实验技术路线图

2．2 免疫组织化学染色

2．2．1 组织标本来源及分组

2．2．2 主要试剂

2．2．3 主要仪器及材料

2．3 苏木精-伊红染色(H-E染色)

2．3．1 主要试剂及材料

2．4 人妊娠晚期子宫下段平滑肌细胞原代培养

2．4．1 组织标本来源

2．4．2 主要试剂

2．4．3 主要仪器及材料

2．5 原代培养的人妊娠晚期子宫下段平滑肌细胞鉴定及NMBR检测

2．5．1 主要试剂

2．5．2 主要仪器及材料

2．6 免疫细胞荧光

2．6．1 主要试剂

2．6．2 主要仪器及材料

2．7 实验方法及步骤

2．7．1 石蜡切片制备

2．7．2 苏木精-伊红染色(HE染色)

2．7．3 免疫组织化学染色

2．7．4 人妊娠晚期子宫下段平滑肌细胞原代培养

2．7．5 细胞传代

2．7．6 细胞冻存

2．7．7 细胞复苏

2．7．8 原代培养的人妊娠晚期子宫下段平滑肌细胞鉴定及NMBR检测

2．7．9 免疫细胞荧光

2．8 统计学分析

3 实验结果

3．1 原代子宫下段平滑肌细胞培养及鉴定

3．2 自然临产前后子宫下段平滑肌组织IIE染色鉴定

3．3 自然临产前后子宫下段平滑肌细胞中p65、c-Jun定位

3．4 自然临产前后子宫平滑肌细胞中p65、c-Jun表达量Pearson相关性分析

3．5 NMB诱导前后子宫p65、c-Jun定位

3．6 NMB诱导前后p65、c-Jun表达

3．7 NMB诱导前后p65、c-Jun共定位

3．8 NMB诱导前后p65、c-Jun表达的相关性分析

4 讨论

4．1 NF-κ B、AP-1表达部位与活性的变化及其与分娩启动的关系

4．2 NMB作用时对NF-κ及AP-1的影响

4．3 NF-κB及AP-1在分娩启动中的相互作用

5 结论

参考文献

综述

攻读学位期间主要的研究成果

致谢