纳米氧化硅空心球负载光敏剂对肝癌体杀伤作用的体内外研究

摘要

目的:
　　探讨纳米化光敏剂与普通光敏剂在不同实验条件下对人HepG2肝癌细胞增殖的抑制作用及其作用机制。
　　方法:
　　应用体外培养的HepG2肝癌细胞，以纳米化photosan及普通photosan为光敏剂，半导体激光器（波长630 nm）为光源进行光照射，在不同浓度光敏剂经不同光照剂量照射后，用MTT法测定光动力治疗后肝癌细胞的存活率，并用流式细胞分析检测光动力治疗对肝癌细胞凋亡的影响，采取western blot检测光动力治疗肝癌细胞后凋亡相关蛋白caspase-3和caspase-9的表达情况，并建立裸鼠动物模型，比较纳米化光敏剂与普通光敏剂在动物体内对肝癌抑制作用。
　　结果:
　　纳米化光敏剂介导的光动力治疗对肝癌有明显的抑制作用，在一定范围条件下，随着光敏剂浓度的增加和光照剂量的增大，肝癌细胞的存活率明显下降，且纳米化光敏剂在同等条件下要优于普通光敏剂。流式细胞分析显示，纳米化光敏剂光动力治疗后肝癌细胞出现了明显的凋亡，较普通光敏剂更显著。Western blot检测结果显示，两种光敏剂均引起凋亡蛋白的表达，且纳米化光敏剂组的表达水平要明显高于普通光敏剂组。体内实验显示:用纳米化光敏剂与普通光敏剂分别对裸鼠肝癌模型干预，纳米化光敏剂组生存期明显优于普通光敏剂组，并且纳米化光敏剂组瘤体的体积大小明显小于普通光敏剂组。
　　结论:
　　纳米化光敏剂较普通光敏剂对肝癌细胞在体内外具有更强的抑制作用，这种抑制作用可能通过引起凋亡相关蛋白高水平的表达，从而促发凋亡通路的开放，引起肝癌细胞发生凋亡。

目录

声明

摘要

中英文缩略词对照表

前言

材料与方法

1 实验材料

1．1 细胞株

1．2 主要试剂

1．3 主要仪器

1．4 主要溶液配制方法

2 实验方法

2．1 细胞培养

2．2 倒置显微镜观察肝癌细胞系HepG-2 PDT治疗前后细胞形态及生长变化

2．3 MTT法测定普通Photosan及纳米化Photosan介导的PDT对人肝癌细胞的杀伤作用

2．4 流式细胞仪法检测普通Photosan及纳米化Photosan介导的PDT对人肝癌细胞系HepG-2的凋亡情况

2．5 Western Bloting检测普通Photosan及纳米化Photosan介导PDT肝癌中相关凋亡蛋白的表达水平

2．6 观察普通Photosan与纳米化Photosan介导的PDT治疗裸鼠人肝癌移植瘤的效果

2．7 普通Photosan与纳米化Photosan介导的PDT对裸鼠人肝癌移植瘤的治疗效果观察

2．8 统计学分析

结果

1 倒置显微镜观察肝癌细胞HepG-2 PDT治疗前后细胞形态及生长变化

2 普通Photosan及纳米化Photosan介导的PDT对人肝癌细胞的杀伤作用

2．1 单用普通Photosan及纳米化Photosan对肝癌HepG-2细胞生长的影响

2．2 单用激光照射对肝癌HepG-2细胞生长的影响

2．3 普通Photosan及纳米化Photosan孵育时间对其介导的PDT杀伤肝癌细胞的影响

2．4 普通Photosan及纳米化Photosan浓度对其介导PDT杀伤肝癌细胞的影响

2．5 激光照射剂量对普通Photosan及纳米化Photosan介导的PDT杀伤肝癌细胞的影响

3 普通Photosan及纳米化Photosan介导的PDT对人肝癌细胞凋亡的影响

4 普通Photosan及纳米化Photosan介导PDT对肝癌细胞中相关凋亡蛋白的表达水平

5 普通Photosan与纳米化Photosan介导的PDT治疗裸鼠人肝癌移植瘤的效果

讨论

结论

参考文献

综述 肝癌的光动力治疗及其进展

攻读学位期间主要研究成果

致谢