多巴胺脱羧酶启动子控制的过表达人源野生型和突变体SNCA基因小鼠的构建和鉴定

摘要

帕金森症(Parkinson's Disease，PD)是第二大神经退行性疾病，它在60岁以上的老人中的发病率仅次于阿尔兹海默症(Alzheimer'sdisease，AD)。PD以细胞内路易小体的形成和多巴胺能神经元的丢失为主要特征，其中路易小体的主要成分为α-synuclein和泛素蛋白。1998年在研究一个家族性PD的家系时，Polymeropolous及其同事发现并鉴定出第一个与PD相关的基因，编码α-synuclein的SNCA基因，它的常染色体显性突变将导致PD。
　　目的:
　　为了研究帕金森症，人们构建和分析了很多种的PD动物模型，尤其是α-synuclein的小鼠模型，但它们都无法模拟PD随着年龄增加逐渐加重的病理特征。为了改善这一不足，我们开始了我们的研究。
　　方法:
　　构建出数个以多巴胺脱羧酶（DopamineDecarboxylase，Ddc）启动子来控制人源野生型SNCA，A53T及A30P突变体表达的转基因小鼠品系。并依次从DNA水平，RNA水平和蛋白质水平进行检测。
　　结果:
　　我们在DNA，RNA水平上均检测出来阳性结果，但在中脑黑质中未能检测到α-synuclein蛋白质的表达。然而，在一只转基因小鼠的肝脏中发现肿瘤及α-syncuelin的表达给了我们新的启示。
　　结论:
　　我们构建的多巴胺脱羧酶启动子的转基因小鼠未能很好地模拟PD的症状，还需要继续进行研究。

目录

声明

摘要

英文缩略词表

前言

第一章 Ddc启动子SNCA转基因小鼠的构建和饲养

1．1 实验材料与试剂

1．1．1 主要实验仪器

1．1．2 主要实验试剂与耗材

1．1．3 实验用小鼠和质粒

1．2 实验方法

第二章 Ddc启动子SNCA转基因小鼠DNA水平的检测

2．1 实验材料与试剂

2．1．1 主要实验仪器

2．1．2 主要实验试剂与耗材

2．1．3 主要试剂的配制

2．2 实验方法

2．2．1．PCR鉴定

2．2．2．Real-time qPCR

2．3 实验结果

2．3．1 鼠尾DNA的PCR鉴定

2．3．2 转基因小鼠中基因拷贝数的鉴定

2．4 分析与讨论

2．5 结论

第三章 Ddc启动子SNCA转基因小鼠mRNA水平的检测

3．1 实验材料与试剂

3．1．1 主要实验仪器

3．1．2 主要实验试剂与耗材

3．1．3 主要试剂的配制

3．2 实验方法

3．2．1 小鼠脑的剥取

3．2．2 鼠脑RNA的抽提

3．2．3 RT-PCR

3．3．实验结果

3．4．实验讨论

第四章 Ddc启动子SNCA转基因小鼠中脑黑质蛋白质水平的检测

4．1 实验材料与试剂

4．1．1 主要实验仪器

4．1．2 主要实验试剂与耗材

4．1．3 主要试剂的配制

4．1．4 实验用小鼠

4．2 实验方法

4．2．1 小鼠脑组织的提取

4．2．2 冰冻切片

4．2．3 免疫荧光

4．2．4．Western blot

4．3 实验结果

4．4 实验讨论

第五章 Ddc启动子SNCA转基因小鼠肝脏肿瘤的发现及α-synuclein的检测

5．1 实验材料与试剂

5．2 实验方法

5．2．1．石蜡切片

5．2．2．HE染色

5．2．3．免疫组织化学

5．3 实验结果

总结

参考文献

综述 帕金森症转基因小鼠研究进展

个人简历

致谢