青藤碱对人外周血CD4T细胞增殖和细胞内Ca浓度影响的体外研究

摘要

目的：通过研究青藤碱(Alkaloidsinomenine，SIN)对人外周血CD4+T细胞增殖和细胞内Ca2+浓度的体外影响，探讨SIN对人外周血CD4+T细胞免疫抑制作用的效应和分子生物学机制，为SIN在器官移植领域中的临床应用提供理论依据，以期为器官移植受者提供安全、有效和价格低廉的免疫抑制治疗方案。　　方法：在衡阳市中心血站抽取一个健康人肘静脉血50ml，肝素(10U/ml)抗凝。用淋巴细胞分离液从血液标本中分离PBMC，并制成PBMC悬液。通过免疫磁珠分离法从PBMC悬液中分选CD4+T细胞。将CD4+T细胞用10％FCSRPMI-1640完全培养液在37℃、5％C02条件下培养。CD4+T细胞经终浓度为5ug/ml的PHA和终浓度为100U/ml的IL-2扩增7天后，均分为5组细胞培养并作以下处理：(1)、空白对照组：细胞培养液中不加入任何药物；(2)、CsA组：细胞培养液中加入终浓度为50ng/ml的CsA溶液；(3)、低浓度SIN组：细胞培养液中加入终浓度为10umol/L的SIN溶液；(4)、中浓度SIN组：细胞培养液中加入终浓度为200umol/L的SIN溶液；(5)、高浓度SIN组：细胞培养液中加入终浓度为1000umol/L的SIN溶液。6小时后，各组细胞培养液中加入终浓度为1ug/ml的抗CD3单克隆抗体。继续培养24小时后，每组细胞均分为3份细胞，对各份细胞进行检测：1)、MTT比色法检测细胞增殖；2)、FCM检测细胞内Ca2+浓度。　　结果：1、MTT比色法测定OD值，计算细胞增殖抑制率(％)：(1)、空白对照组：0.00±0.00；(2)、CsA组：72.62±0.85；(3)、低浓度SIN组：2.25±1.58；(4)、中浓度SIN组：27.65±1.65；(5)、高浓度SIN组：40.12±1.08。高浓度SIN组、中浓度SIN组与其它各组比较均有显著性差异(P＜0.05)；低浓度SIN组与空白对照组比较无显著性差异(P＞0.05)；CsA组的细胞增殖抑制率最高SIN的浓度与人外周血CD4+T细胞增殖抑制率之间存在显著性正相关。2、FCM检测细胞内Ca2+浓度结果(以Ca2+荧光强度表示)：(1)、空白对照组：11.00±0.20；(2)、CsA组：11.90±0.27；(3)、低浓度SIN组.11.30±0.26；(4)、中浓度SIN组：7.57±0.15；(5)、高浓度SIN组：6.00±0.10。中浓度SIN组、高浓度SIN组与其它各组比较均有显著性差异(P＜0.05)；低浓度SIN组与对照组、CsA组分别比较无显著性差异(P＞0.05)；SIN的浓度与人外周血CD4+T细胞内Ca2+浓度之间存在显著性负相关。3、经不同浓度的SIN处理后，人外周血CD4+T细胞增殖抑制率和细胞内Ca2+浓度之间存在显著性负相关。结语：SIN能浓度依赖性地抑制人外周血CD4+T细胞增殖和细胞内Ca2+浓度升高。SIN对人外周血CD4+T细胞免疫抑制作用的分子生物学机制与其抑制细胞内Ca2+浓度升高相关，它有潜力成为移植免疫抑制药物的新成员。

目录

原创性声明及关于学位论文使用授权说明

主要缩略语中英文索引

第一章前言

第二章材料和方法

第三章 实验结果

第四章讨论

第五章结语

参考文献

综述 钙离子运动在T细胞活化住处传导中的意义和机制

读研期间发表的论文

致谢