组蛋白乙酰化在DADS体内外诱导人胃癌细胞分化中的作用

摘要

第一部分DADS诱导MGC803细胞分化与组蛋白乙酰化的体外研究　　目的：探讨二烯丙基二硫(diallyldisulfide，DADS)体外诱导人胃癌MGC803细胞分化过程中组蛋白乙酰化状态及其调控p21WAF1蛋白表达改变的情况。　　方法：体外培养人胃癌MGC803细胞，采用倒置显微镜和光镜观察、图像分析以及WesternBlot等方法，观察DADS诱导MGC803细胞分化时对其组蛋白乙酰化及相关p21WAF1蛋白的表达变化。　　结果：HE染色及图象分析结果显示：DADS处理人胃癌细胞24h后细胞面积、胞浆面积明显增大，核面积、核浆比例明显减少，细胞异型性明显减小。Westernblot结果显示DADS处理细胞6h后其组蛋白H3乙酰化程度明显升高，12h达到最高，与未处理DADS组比较增加了38％；H4乙酰化程度无明显改变。p21WAF1蛋白增加出现在DADS处理12h后，24h达到最高。　　结论：1.DADS对MGC803细胞的诱导分化作用与核组蛋白H3乙酰化水平增加有关。　　2.DADS诱导MGC803细胞分化时有抑癌基因p21WAF1蛋白表达的上调。　　第二部分DADS诱导MGC803细胞分化与组蛋白乙酰化的体内研究　　目的：观察二烯丙基二硫(DADS)在体内诱导胃癌细胞分化的作用及对人胃癌细胞移植瘤组蛋白乙酰化的影响。　　方法：裸鼠皮下注入人胃癌细胞MGC803建立人胃癌异种移植模型，分别用未经药物处理和30mg·L-1DADS处理1天的胃癌细胞接种于裸鼠皮下。观察体外DADS处理MGC803细胞裸鼠移植瘤的成瘤情况和未处理MGC803细胞移植瘤成瘤后腹腔注射DADS对胃癌移植瘤在BALB/C裸鼠体内生长情况的影响。采用光学显微镜观察移植瘤细胞形态变化，流式细胞光度术检测DADS对瘤组织细胞周期分布的影响，Westernblot检测各组瘤组织中增殖细胞核抗原(PCNA)及p21WAF1蛋白、组蛋白H3、H4乙酰化的表达情况。　　结果：体外DADS处理的MGC803细胞在裸鼠体内无一成瘤，腹腔注射DADS剂量为50mg·kg-1、100mg·kg-1和200mg·kg-1时可明显抑制移植瘤的生长其抑瘤率分别为27.8％、66.1％和73.0％，同时可抑制移植瘤癌细胞PCNA的表达。光学显微镜显示经DADS处理后瘤细胞密度及异型性明显减小。流式细胞仪分析结果显示DADS呈浓度依赖性将移植瘤细胞阻滞在G2/M期。DADS浓度为100mg·kg-1和200mg·kg-1作用瘤细胞后，与对照组相比分别可使G2/M期细胞增加2.22和3.37倍。Westernblot分析表明在G2/M期阻滞同时有组蛋白H3乙酰化表达增加，但组蛋白H4乙酰化表达水平不受DADS作用的影响；瘤组织中的p21WAF1蛋白表达量也随DADS浓度升高而上升。　　结论：1.DADS可明显降低人胃癌MGC803细胞裸鼠移植瘤的成瘤性。2.DADS对体内的人胃癌MGC803细胞有较强的抗增殖和诱导分化作用。3.DADS对移植瘤细胞的抗增殖和诱导分化作用与其增加瘤细胞组蛋白乙酰化、引起p21WAF1蛋白表达上调，从而将移植瘤细胞阻滞在G2/M期有关。

目录

论文说明：资助

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前言

材料与方法

结果

第一部分二烯丙基二硫体外诱导人胃癌细胞分化作用中组蛋白乙酰化的变化

第二部分二烯丙基二硫体内诱导人胃癌细胞分化作用中组蛋白惭酰化水平改变的研究

一、裸鼠生长及成瘤情况

二、DADS对移植瘤的生长抑制作用

三、DADS处理后移植瘤的形态学改变

四、Western blot 分析

五、流式细胞术检测

六、DADS对荷瘤鼠体内的毒性作用

讨论

结论

参考文献

综述烯丙基硫化物的抗肿瘤新进展

硕士期间撰写的论文

主要英文缩略语索引

致谢