重组人生长激素对人直肠癌小鼠肾包膜下移植瘤生长的影响

摘要

目的:观察重组人生长激素(recombinant human growth hormone,rhGH)及其与5-氟脲嘧啶(5-flurouracil,5-FU)联用对人直肠癌小鼠肾包膜下移植瘤生长的影响,探讨rhGH在体内是否具有促进肿瘤生长的作用及其与5-FU联用在恶性肿瘤病人围手术期临床应用的可行性。
　　方法:近交系BALB/C雄性小鼠45只,6~8周龄,体重18~24g,实验前24h每只小鼠一次性皮下注射CTX100mg/kg,制成环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)免疫抑制小鼠模型。随机分成2大组,第一大组(30只)分为五个小组,每小组6只,分别为:I NS组、II rhGH1组、III rhGH2组、IV rhGH1+5-FU组、V5-FU组。第二大组(15只)亦分为同样的五个小组,每组3只,进行同样的治疗。实验当天进行人直肠癌标本小鼠肾被膜下移植(Subrenal Capsule Assay,SRCA),随即用带有目镜测微尺的解剖显微镜原位测量透明的肾包膜下之移植块,记录其长(L)宽(W)径,其单位mm,按通用标准公式计算移植瘤体积(V),V=L×W2/2,自接种术后一天起进行治疗。NS组:每日小鼠皮下和腹腔分别注射生理盐水0.2ml、0.5ml;rhGH1组:每日小鼠皮下注射rhGH1UI/kg;rhGH2组:每日小鼠皮下注射rhGH3UI/kg;rhGH1+5-FU组:每日小鼠皮下注射 rhGH1UI/kg、腹腔注射5-FU20mg/kg;5-FU组:每日小鼠腹腔注射5-FU20mg/kg;连续用药7天。第一大组小鼠接种术后10天处死。隔日为小鼠称量体重及处死前再次称重,处死小鼠前摘除眼球采血,测血常规,处死各组小鼠后解剖小鼠同法原位测量移植块体积,比较各小组间移植瘤末初体积差(TS=末体积-初体积)及抑瘤率〔IR(％)=(C-T)/C×100%〕,比较各小组间移植瘤组织学变化及PCNA、cyclinD1和p16蛋白表达的变化。第二大组小鼠移植肿瘤成功后,正常饲养,待其自然死亡,记录生存期并比较各小组平均生存时间。
　　结果:1、NS组(15.00±4.31mm3)、rhGH1组(14.56±1.70mm3)及rhGH2组(14.29±2.46mm3)组间移植瘤TS比较差异无显著性(P值分别为:0.758、0.616、0.854);rhGH1+5-FU组(4.20±0.66mm3)和5-FU组(3.57±0.52mm3)分别与上述三组比较,移植瘤、TS明显缩小差异有显著性(P值均为:0.000);而该二组间差异无显著性(P值:0.674)。各组小鼠抑瘤率5-FU组:76.20%、rhGH1+5-FU组:72.00%、rhGH1组:2.93%、rhGH2组:4.73%、NS组:0%。2、rhGH1组、rhGH2组及rhGH1+5-FU组用药后小鼠体重显著高于手术前一天(P值分别为:0.000、0.001、0.027);实验开始用药后,rhGH1组、rhGH2组及rhGH1+5-FU组小鼠体重曲线缓慢上升,稍高于NS组及5-FU组。3、rhGH1+5-FU组(57.00±6.08天)和5-FU组(53.33±8.32天)平均生存期均高于NS组(37.33±3.33天),差异有显著性(P值分别为:0.004、0.012)。rhGH1+5-FU组(4.53±1.45×109)白细胞数值显著高于5-FU组(2.74±1.55×109)(P值:0.029)。rhGH1组(120.16±11.26g/L)、rhGH2组(119.50±09.12g/L)血红蛋白均高于NS组(106.50±11.67g/L),差异有显著性(P值分别为:0.018、0.024),rhGH1+5-FU组(113.66±8.43g/L)血红蛋白高于5-FU组(98.6±6.56g/L),差异有显著性(P值:0.014)。4、(HE染色)NS组和rhGH各组的病理形态相似;而rhGH1+5-FU组和5-FU组与前三组有较大的差异,表现为实质细胞减少,间质增多。5、rhGH1组、rhGH2组与NS组移植瘤PCNA、cyclinD1及p16蛋白表达无显著差异(P>0.05),而rhGH1+5-FU组与5-FU组移植瘤PCNA、cyclinD1及p16蛋白表达亦无显著差异(P>0.05)。
　　结论:
　　1、rhGH对人直肠癌小鼠肾包膜下移植瘤生长无明显促进作用。
　　2、rhGH对5-FU抑制小鼠肾包膜下移植瘤作用无明显影响。
　　3、rhGH可延长实验小鼠的生存期,增加其体重及血红蛋白含量;减轻5-FU的骨髓抑制反应。
　　4、rhGH对人直肠癌小鼠肾包膜下移植瘤PCNA、cyclinD1及p16蛋白表达无明显影响。

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前言

材料和方法

1 材 料

1.1 肿瘤来源

1.2 动物来源

1.3 药物和试剂

1.4 主要仪器：

2 方 法

2.1 实验分组

2.2肿瘤标本处理

2.3动物实验

2.4制片和HE染色

2.5免疫组化染色及判断标准

2.6统计学方法

结果

1 SRCA法测定rhGH对人直肠癌小鼠肾被膜下移植瘤△TS及IR的影响

2各组荷瘤小鼠体重的变化

3各组荷瘤小鼠生存期及白细胞的变化

4各组移植瘤病理形态的变化

5各组移植瘤PCNA、cyclinD1及p16蛋白的表达

讨论

结论

参考文献

附综述：

成果目录

致谢