多环芳烃暴露标志物1-羟基芘检测新方法及应用研究

摘要

多环芳烃(Polycyclic Aromatic Hydrocarbons，PAHs)是一类普遍存在的持久性有机污染物，在职业高PAHs暴露环境下，容易诱发肺癌、皮肤癌等癌症，已被各国列为优先控制的污染物。对PAHs的暴露评价可为流行病学研究和污染物风险评价等提供依据。由于暴露途径的复杂化，采用尿样中1-羟基芘作为标志物来综合评价人体对PAHs的内暴露情况已经成为研究的热点。因而研究1-羟基芘检测的新方法及1-羟基芘与染料或蛋白质的作用机制具有重要的现实意义。 本文第二章应用共振光散射技术建立了1-羟基芘检测的新方法。研究表明：在Ph8.0的 Tris-HCl缓冲溶液中，乙基紫与1-羟基芘反应形成离子缔合物，导致体系的共振光散射增强，最大共振光散射峰位于396nm。加入阴离子表面活性剂十二烷基苯磺酸钠可起增稳增敏作用。在最佳实验条件下，共振光散射的增强(ΔIRLS)在4.0~982.0μg/L范围内与1-羟基芘浓度成线性关系，r=0.9994，方法的检出限为1.2μg/ L，RSD=4.5％~5.3％，加标回收率为93.3％~102.3％。方法简便、灵敏，已应用于实际样品的测定，结果与常规的高效液相色谱法一致。 本文第三章研究了1-羟基芘对吖啶橙-罗丹明6G混合体系的荧光猝灭效应和作用机制，建立了共振能量转移荧光猝灭法检测1-羟基芘的新方法。实验表明，在λex/λem= 470/556nm，十二烷基苯磺酸钠存在下，吖啶橙-罗丹明6G能够发生有效的能量转移，使罗丹明6G的荧光大大增强；1-羟基芘的加入使罗丹明6G的荧光猝灭。其猝灭机制为静态荧光猝灭过程。在21.3—982.0μg/L范围内，1-羟基芘浓度与罗丹明6G的荧光猝灭强度成线性关系，方法的检出限为6.4μg/L，相对标准偏差为0.98％~2.03％，加标回收率为96.0％~104.4％。该方法简便、快速，应用于人尿中痕量1-羟基芘的测定，结果满意。 本文第四章应用荧光光谱法研究了1-羟基芘与牛血清白蛋白分子之间的作用机制及能量转移关系，求得它们之间的结合常数K=3.15×104L/mol，结合位点数为0.97(t=20℃)。根据F?rster非辐射能量转移理论求得能量转移效率E=0.43，供体－受体之间的距离r=3.08nm；确定了1-羟基芘与血清白蛋白分子之间的作用力主要为氢键和范德华力。在此基础上建立了共振能量转移荧光法测定1-羟基芘的新方法，该方法准确、灵敏，用于人尿中痕量1-羟基芘的测定，结果与高效液相色谱法一致。