6，8-二-三氟甲基-7-乙酰氧基白杨素抑制蛋白激酶诱导人卵巢癌CoC1细胞凋亡的研究

摘要

目的：研究6,8-二－三氟甲基-7-乙酰氧基白杨素（6,8-ditrifluoromethyl-7-aceto-xychrysin，dFMAChR）抑制体外培养人卵巢癌细胞系CoC1细胞增殖和诱导凋亡作用及机制，为寻找具有开发前景的卵巢癌治疗活性新化学实体提供理论和实验依据。 方法：体外培养CoC1细胞，MTT比色法测定dFMAChR对CoC1细胞增殖的影响；细胞计数法测定细胞存活率，绘制细胞生长曲线；软琼脂克隆形成法检测dFMAChR对体外培养CoC1细胞的非锚定依赖性生长作用；AO/EB染色法荧光显微镜观察dFMAChR诱导CoC1凋亡细胞的形态学改变；DNA凝胶电泳确证dFMAChR诱导CoC1细胞凋亡作用；PI染色流式细胞术(FCM)定量分析dFMAChR诱导CoC1细胞凋亡程度；Western blot法分析dFMAChR对CoC1细胞蛋白激酶CK2α、β-Catenin 、NF-κB(p65)蛋白表达和活性的影响。 结果：MTT比色法测定结果显示：以浓度为0.3、1.0、3.0、10.0、30.0μM的dFMAChR分别处理人卵巢癌CoC1细胞48小时，其细胞增殖相对抑制率分别为11.9％±1.15％、19.2％±2.05％、39.9％±2.24％、48.5％±3.37％、58.8％±2.74％，呈剂量依赖性抑制CoC1细胞增殖，IC50值为 11.8μM。细胞计数法检测结果表明：3.0、10.0、30.0μM 的dFMAChR抑制Coc1细胞生长，呈剂量依赖性；10μM的dFMAChR 可使Coc1细胞群体倍增时间延长,由28.5h延长至32.6h。软琼脂克隆形成法的结果显示，dFMAChR(3.0、10.0、30.0 μM)处理的人卵巢癌CoC1细胞的集落抑制率分别为31.2％±2.07％、48.6％±3.28％、68.5％±4.46％。AO/EB染色荧光显微镜观察dFMAChR处理后，部分CoC1细胞呈现典型凋亡细胞形态特征。dFMAChR(10.0μM)处理CoC1细胞48h，琼脂糖凝胶电泳呈现“梯形”DNA条带。PI染色FCM分析发现3.0、10.0、30.0μM的dFMAChR作用于CoC1细胞48h后，细胞凋亡率分别是4.70％±1.02％、10.74％±1.03％、35.12％±3.13％；dFMAChR (30.0μM)处理后的凋亡率高于相同浓度的先导化合物白杨素(Chrysin,ChR) 处理后的凋亡率(30.07％±2.07％)。Western blot分析结果显示：0.3、3.0、30.0μM的dFMAChR处理24小时后与空白对照组比较，CoC1细胞CK2α、β-Catenin 、NF-κB(p65)蛋白表达分别下调13.2％±1.42％、27.4％±2.30％、41.7％±2.0％，12.4％±4.30％、26.4％±2.11％、37.4％±1.70％，7.8％±1.62％、26.5％±3.43％、40.5％±3.16％。30.0μM的dFMAChR处理4、8、24小时后，CoC1细胞CK2α、β-Catenin 、NF-κB (p65)蛋白表达分别下调8.3％±3.02％、30％±3.48％、49.7％±1.76％ ，36.3％±4.30％、45.3％±2.11％、56.6％±1.70％，32.8％±0.98％、48.2％±0.90％、50.3％±1.38％。 结论: 1）dFMAChR抑制体外培养人卵巢癌细胞系CoC1细胞增殖和生长，呈浓度依赖性。 2）dFMAChR具有诱导人卵巢癌细胞CoC1细胞凋亡作用。 3）dFMAChR诱导人卵巢癌细胞生长抑制和凋亡作用与其下调CK2α、β-Catenin 、NF-κB(p65)蛋白表达相关。