P53在实验性隐睾生精细胞凋亡中的作用及氨基胍对P53表达的影响

摘要

第一部分:
　　目的:探讨 P53在隐睾所致生精细胞凋亡过程中的作用及其与 Bcl-2/Bax的关系。
　　方法:将42日龄雄性SD大鼠32只随机分为假手术组、隐睾+p53抑制剂(p-fifty three inhibitor-alpha,PFT-α)组、隐睾+PFT-α溶媒组、隐睾组。麻醉后下腹正中切口,隐睾组建立单侧隐睾模型,模型建立按文献操作,大鼠切断右侧睾丸引带,将右侧睾丸固定于腹后壁后关腹,术后未注射任何药物;隐睾+PFT-α组和隐睾+溶媒组大鼠右侧睾丸手术处理方法同隐睾组,术后分别腹腔内注射PFT-α和溶媒;假手术组将右侧睾丸切断引带后还纳入阴囊关腹。第7天脱颈椎处死大鼠,留取各组大鼠双侧睾丸称湿重,常规组织学观察各组右侧睾丸生精上皮形态,TUNEL原位末端标记法结合流式细胞术(FCM)检测各组右侧睾丸生精细胞凋亡程度, Western blot和免疫组化分别检测右侧睾丸 P53、Bcl-2/Bax蛋白表达的变化。
　　结果:除假手术组外,其余各组右侧睾丸重量均轻于左侧睾丸;隐睾组和隐睾+溶媒组右侧睾丸重量明显轻于其它组右侧睾丸;隐睾+PFT-α组隐睾重量大于隐睾组及隐睾+溶媒组;隐睾组和隐睾+溶媒组之间各检测指标差异无显著性意义。凋亡指数(AI)在隐睾组和隐睾+溶媒组最高,假手术组最低;隐睾+PFT-α组中低于隐睾+溶媒组,差别均有显著性意义。Western blot和免疫组化显示P53和Bax蛋白在假手术组睾丸中表达最低,隐睾组和隐睾+溶媒组中表达最高,在隐睾+PFT-α组中低于隐睾+溶媒组;Bcl-2蛋白在假手术组睾丸中含量最高,隐睾组和隐睾+溶媒组中含量最低,在隐睾+ PFT-α组中高于隐睾+溶媒组,差别均有显著性意义。
　　结论:1.实验性隐睾生精细胞凋亡过程中P53表达增加;
　　2. PFT-α通过上调Bcl-2、下调Bax的表达,抑制实验性隐睾所致的生精细胞过度凋亡;
　　第二部分:
　　目的:通过观察氨基胍对隐睾生精细胞凋亡过程中 P53表达的影响,探讨生精细胞凋亡过程中NO与P53的关系。
　　方法:将42日龄雄性 SD大鼠32只随机分为假手术组、隐睾+氨基胍(Aminoguanidine,AG,iNOS抑制剂)组、隐睾+NS(AG溶媒)组和隐睾组。麻醉后下腹正中切口,建立单侧隐睾模型,模型建立按文献操作[10],隐睾组大鼠切断右侧睾丸引带,将右侧睾丸固定于腹后壁后关腹,术后未注射任何药物;隐睾+AG组、隐睾+NS组大鼠右侧睾丸手术处理方法同隐睾组大鼠,术后分别腹腔内注射 AG、NS;假手术组将右侧睾丸切断引带后还纳入阴囊关腹。术后第7天给药后颈动脉采血,取血清于-20℃冻存,用于硝酸还原酶法测定血清 NO含量,化学比色法测血清NOS活性。脱颈椎处死大鼠,留取各组大鼠双侧睾丸称湿重,常规组织学观察各组右侧睾丸生精上皮形态,TUNEL原位末端标记法结合FCM检测各组右侧睾丸生精细胞凋亡,Western blot和免疫组化分别检测右侧睾丸P53和iNOS蛋白表达的变化。
　　结果:除假手术组外,其余各组右侧睾丸重量均轻于左侧睾丸;隐睾组和隐睾+NS组右侧睾丸重量明显轻于其它各组右侧睾丸;隐睾+AG组隐睾重量明显大于隐睾组及隐睾+NS组。血清 NO含量和NOS活性在隐睾组和隐睾+NS组最高,隐睾+AG组次之,假手术组最低。亚倍体生精细胞百分比和凋亡指数(AI)在隐睾组和隐睾+NS组最高,假手术组最低;在隐睾+AG组中低于隐睾+NS组,差别均有显著性意义。Western blot和免疫组化显示P53蛋白在假手术组睾丸中表达最低,隐睾组和隐睾+NS组中含量最高,在隐睾+AG组中低于隐睾+NS组;iNOS蛋白在假手术组表达最弱;在其余各组表达较强且差别无显著性。
　　结论:1.AG能通过下调P53的表达,抑制实验性隐睾生精细胞的过度凋亡;
　　2.实验性隐睾生精细胞过度凋亡,可能是由于 NO的产生过多,促使P53的表达增强,从而上调Bax,下调Bcl-2造成的。

目录

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前言

主要缩略语英文索引

第一部分P53在隐睾生精细胞凋亡中的表达及其抑制剂对BCL-2/BAX表达的影响

中文摘要

英文摘要

材料和方法

1. 实验材料

2. 实验方法

实 验 结 果

1. 两侧睾丸大体改变及重量变化

2. 各组大鼠右侧睾丸的组织学变化

3. 各组大鼠右侧睾丸内p53、bcl-2/bax的表达变化

4. TUNEL法对生精细胞凋亡的检测

5. 流式细胞术测定DNA含量

6. Western blot检测P53、Bcl-2/Bax蛋白量的变化

讨论

1. 隐睾与生精细胞凋亡

2．P53在隐睾所致生精细胞凋亡中的表达

3．P53抑制剂PFT-α对实验性隐睾生精细胞凋亡的影响

4．PFT-α对实验性隐睾生精细胞凋亡过程中BCL/BAX的调节作用

结论

第二部分氨基胍对实验性隐睾生精细胞凋亡P53表达的调节

中文摘要

封面

材料和方法

1. 实验材料

2. 实验方法

实 验 结 果

1. 双侧睾丸大体形态变化

2. 各组大鼠右侧睾丸的组织学变化

3. 各组大鼠血清NO浓度和NOS活性的变化

4. 各组大鼠右侧睾丸内p53和iNOS表达的变化

5. TUNEL法对生精细胞凋亡的检测

6. 流式细胞术测定DNA含量

7. Western blot检测P53和iNOS蛋白量的变化

讨论

1. AG在实验性隐睾所致生精细胞凋亡过程中的作用

2. AG对实验性隐睾生精细胞凋亡过程中P53的调节作用

3. 隐睾所致生精细胞凋亡过程中NO与P53以及BCL家族的关系

结论

参考文献

附图

综述

硕士期间的成果目录

致谢