rVBMDMP抑制人肝癌细胞增殖和血管生成的研究

摘要

目的： 评价重组血管基膜衍生多功能肽(recombinant Vascular Basement Membrane-derived Multifunctional Peptide，rVBMDMP)对人肝癌(HepG2，Bel-7402，Hep-3B)细胞系细胞和内皮细胞(ECs)HUVE-12细胞系细胞的选择性抑制作用；观察rVBMDMP抑制人肝癌HepG2裸鼠移植瘤生长和血管生成作用，评价其对肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma，HCC)的在体治疗效果。 方法： 体外培养人肝癌(HepG2，Bel-7402，Hep-3B)细胞系细胞，人脐静脉内皮细胞(HUVE-12)和正常人胚肝(L-02)细胞系细胞，MTT比色法测定rVBMDMP对人肝癌细胞和内皮细胞增殖的选择性抑制作用。人肝癌HepG2裸鼠移植瘤模型治疗实验，评价rVBMDMP治疗人肝癌的有效性；取移植瘤组织，免疫组化DAB染色观察rVBMDMP在移植瘤组织中的表达；免疫组化S-P法检测移植瘤细胞的增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen，PCNA)的表达；免疫组化S-P法检测移植瘤组织中CD31的表达，计数微血管密度(Microvesseldensity，MVD)。 结果： 1.MTT比色法结果表明：rVBMDMP能选择性抑制人肝癌(HepG2，Bel-7402，Hep-3B)细胞和人脐静脉内皮细胞(HUVE-12)的增殖，呈浓度依赖性，而对L-02细胞的增殖活性影响小，IC50值分别为4.68，7.65，8.96，11.65和64.82μmol/L。100 mg/L贝伐单抗(Bevacizumab，重组人靶向VEGF单克隆抗体)对HepG2，Bel-7402，Hep-3B和L-02细胞增殖均几无影响，但对HUVE-12细胞的生长抑制率达到87.6±8.2％。 2.人肝癌HepG2裸鼠移植瘤模型治疗实验结果显示：rVBMDMP能显著抑制移植瘤的生长，呈剂量依赖性趋势。1.0 mg/kg、3.0 mg/kg和10.0 mg/kg的rVBMDMP对人肝癌HepG2肿瘤生长抑制率分别是12.40％，55.78％和79.73％，瘤重抑制率分别为12.58％，55.97％和79.87％。其中3.0 mg/kg的rVBMDMP的肿瘤生长抑制率(55.78％)和瘤重抑制率(55.97％)近似于10.0 mg/kg的Bevacizumab(56.45％，57.23％)：而10.0 mg/kg的rVBMDMP的肿瘤生长抑制率(79.73％)和瘤重抑制率(79.87％)均接近20.0 mg/kg的5-FU(80.07％，80.50％)。 3.免疫组化DAB染色检测结果显示：rVBMDMP(1.0，3.0，10.0 mg/kg)处理组阳性染色百分比分别为2.2%±0.73％，4.5％±1.3％和11.5%±3.8％，明显高于生理盐水对照组(0.13％±0.04％)，P<0.01。 4.免疫组化S-P法检测结果表明：rVBMDMP处理的人肝癌HepG2裸鼠移植瘤组织，PCNA染色阳性区域面积百分比随着rVBMDMP浓度的增加显著降低。rVBMDMP(1.0，3.0，10.0 mg/kg)处理组PCNA染色阳性百分比分别为：19.0%±5.7％，12.2%±3.5％和5.2%±1.6％，显著低于生理盐水对照组(29.5%±9.4％)，P<0.05。 5.免疫组化S-P法检测结果证实：rVBMDMP处理的人肝癌HepG2裸鼠移植瘤组织，CD31染色阳性区域面积百分比随着rVBMDMP浓度的增加明显减少。rVBMDMP(1.0，3.0，10.0 mg/kg)处理组CD31染色阳性百分比分别为：0.26％±0.07％，0.12%±0.03％和0.05%±0.01％，明显少于生理盐水对照组(0.47%±0.15％)，P<0.05。 结论： 1.rVBMDMP抑制人肝癌细胞(HepG2，Bel-7402，Hep-3B)和人脐静脉内皮细胞(HUVE-12)的增殖，呈浓度依赖性，对人胚肝L-02细胞影响小。 2.rVBMDMP通过靶向累积于人肝癌HepG2裸鼠移植瘤组织，降低移植瘤组织细胞PCNA的表达，减少移植瘤组织微血管面积(Microvessel area，MVA)，显著抑制人肝癌HepG2裸鼠移植瘤生长。