Let-7g对肝癌BEL7402/5-FU细胞CRD-BP表达及对5-FU敏感性的影响

摘要

目的：探讨miRNA let-7g沉默CRD-BP对肝癌耐药细胞株BEL7402/5-FU敏感性的影响以及作用机制。 方法：miRNA芯片检测BEL-7402和BEL-7402/5-FU细胞中表达差异显著的miRNA，采用靶基因预测软件及现有文献出分析出与CRD-BP基因相互作用的miRNA。构建目的let-7g的真核表达载体，将该载体转染至BEL7402/5-FU细胞；MTT检测细胞活性、流式细胞仪检测细胞凋亡情况；RT-PCR检测CRD-BPmRNA水平，Western Blot检测CRD-BP、C-myc、P-gp蛋白表达的变化。 结果：通过以上两种方法结果的比对，筛选出以let-7g为目的miRNA，转染至BEL-7402/5-FU细胞中。分别用0、0.001、0.01、0.1、1μmol/ml氟尿嘧啶处理细胞24小时后，MTT显示let-7g转染组细胞生长抑制率较未转染组和阴性转染组明显增高(12.38±0.82％vs.2.31±0.34％or2.24±1.80％；13.78±1.06％vs.2.54±1.61％or2.42±0.39％；27.36±0.50％vs.4.48±0.61％or3.59±0.41％；42.04±0.27％vs.20.52±0.71％or20.18±0.28％；P<0.05)。5-FU的IC50值显示let-7g转染组较未转染组和阴性转染组有显著降低。用0.1μmol/ml5-FU处理细胞48小时，流式细胞仪检测，凋亡率分别为：1.75±1.40％，1.45±1.24％vs.40.4±0.56％，let-7g转染组较未转染组和阴性转染组凋亡率有显著增加；Western blot检测转染let-7g转染组与未转染组、阴性转染组比较：CRD-BP、C-myc及P-gp蛋白表达水平均降低。分别用0、0.001、0.01、0.1、1μmol/ml阿霉素处理肝癌细胞BEL-7402/5-FU24小时后，MTT显示let-7g转染组细胞生长抑制率较未转染组和阴性转染组明显增高(12.35±1.650％vs.2.48±0.63％or3.16±1.80％：16.13±1.14％vs。3.55±1.05％or3.65±0.76％；36.24±0.38％vs.4.84±0.65％or6.97±0.85％；49.75±0.65％vs.21.69±0.79％or19.27±1.23％；P<0.05)。阿霉素的IC50值显示let-7g转染组较未转染组和阴性转染组有显著降低。 结论：let-7g能增加BEL-7402/5-FU细胞对氟尿嘧啶及阿霉素的敏感性，促进BEL7402/5-FU细胞凋亡。 let-7g能下调BEL-7402/5-FU细胞CRD-BP的表达、降低C-myc和P-gp蛋白表达。