血浆中醛类物质与SSAO酶活性的检测新方法及应用

摘要

醛类物质是含有端位醛基的一类化合物，由于它在工业上的广泛应用和极强的毒性效应而受到越来越多的重视。醛类物质具有致癌性，它们不仅能使DNA断裂，还能使DNA-DNA链间交联和DNA-蛋白质交联。现行检测方法要么操作繁琐、仪器昂贵；要么灵敏度达不到要求，而且多为单独检测脂肪醛或者芳香醛，同时检测的方法鲜见报道，因而，研究醛类物质的检测新方法有着极其重要的现实意义。 本文第二章应用反相高效液相色谱-紫外检测器法建立了同时检测血浆中甲醛、乙醛和苯甲醛的新方法。采用DiamonsilTMC18(5μm，150×4.6 nm)色谱柱，以V(甲醇)：V(0.05％甲酸水)=75:25为流动相，在波长365 nm处检测，柱温为50℃，流速为1.5 mL/min。结果表明，当甲醛、乙醛和苯甲醛的质量浓度分别为0.05312～21.25μg/mL，0.05000～20.00μg/mL，0.03750～15.00μg/mL时，峰面积和质量浓度呈很好的线性关系，相对标准偏差分别为0.5%～2.2％、0.9％～4.7％、0.7％～2.6％(n=6)，平均回收率分别为101.4％、93.6％、63.0％。SSAO酶在0.3750～150.0 nmol/mL/h的活性浓度范围之内时，与峰面积线性关系良好，相关系数r=0.9996，检测限为0.1500nmol/mL/h，相对标准偏差为4.5%～4.8％。方法准确可靠，已用于血浆中甲醛、乙醛和苯甲醛的同时测定和SSAO酶活性的评价。 本文第三章应用2，4-二硝基苯肼(DNPH)衍生苯甲醛共振光散射技术建立了测定血浆中SSAO酶活性的新方法。苯甲胺在SSAO酶的催化作用下能生成苯甲醛，在B-R缓冲液中，苯甲醛与DNPH发生反应生成苯甲醛2,4-二硝基苯腙，导致体系共振光散射强度大大增强，体系最大RLS峰位于502.4 nm处，其增加的散射光强度与SSAO酶活性呈良好的线性关系。本实验用单位时间内苯甲胺在SSAO酶的催化作用下生成的苯甲醛的含量来评价血浆中的SSAO酶活性，其活性单位为nmol/mL/h。SSAO酶活性浓度的线性范围为5.767×10-0.3400 nmol/mL/h，相关系数为r=0.9994，检出限为1.922×10-3 nmol/mL/h，相对标准偏差为2.8%～4.1％，平均回收率为67.6％(n=6)。 本文第四章应用催化共振荧光技术建立了血浆中痕量甲醛的测定方法。在稀硫酸介质中，甲醛对溴酸钾氧化吡哕红Y的反应具有催化作用。当激发单色器和发射单色器的波长差△λ=0 nm时，进行同步扫描，测定574.6 nm处增加的共振荧光强度与1.141×10-2～2.280μg/mL范围内的甲醛浓度成良好的线性关系，相关系数r=0.9997，检出限3.804×10-3μg/mL，相对标准偏差为4.9％-7.9％，平均回收率为101.6％(n=6)。已应用于血浆中痕量甲醛的测定，结果与DNPH衍生共振光散射法一致。