参芎注射液对大鼠脑缺血再灌注后Fas通路相关因子的表达的影响

摘要

目的：通过检测脑缺血再灌注后不同时间点的脑梗死体积，神经细胞凋亡改变及Fas凋亡通路相关因子FADD、Caspase-8、FLIP在大鼠脑组织内的蛋白含量及其mRNA表达变化，并以参芎葡萄糖注射液作干预，观察其对上述指标的影响，以期进一步探讨脑缺血再灌注后神经细胞凋亡分子病理机制及参芎注射液的神经保护机制，从而为脑梗死的防治提供一定的理论基础。 方法：10-12周龄健康雄性Sprague-Dawley大鼠115只，随机分为正常组(n=10)、假手术对照组(n=15)、脑缺血再灌注模型组(模型组，n=45)和参芎治疗组(干预组，n=45)。线栓法制备大脑中动脉梗塞(MCAO)模型，缺血2小时后恢复灌注，干预组在脑缺血再灌注即刻和以后每12小时各腹腔注射参芎注射液33.3ml/kg，模型组于相同时间点注射等量的生理盐水。以Longa’s的5级标准评分法评价神经功能缺损。再灌注后6、12、24及72小时处死动物。HE染色及TTC染色观察病理学变化，免疫组织化学及RT-PCR法分别检测缺血侧顶叶大脑皮层FADD、Caspase-8、FLIP的蛋白及其mRNA表达变化，末端标记法原位检测神经细胞凋亡。 结果：(1)模型成功率为73.70％，参芎注射液干预能显著减少大鼠神经功能缺损评分(P<0.05)。(2)模型组再灌注72小时HE染色显示出典型的坏死灶和神经元丢失，参芎注射液干预可以减轻上述损害。TTC染色示：正常组与假手术组大鼠均未见梗死灶，模型组梗死灶明显，干预组的脑梗死体积显著小于模型组(P<0.05)。(3)正常组和假手术组偶尔可以检测到凋亡细胞；模型组再灌注6小时凋亡细胞始增加，以后时间点持续增加，至72小时达到高峰；参芎注射液干预可显著减少大鼠脑缺血再灌注损伤后凋亡细胞数量(P<0.05～0.001)。(4)正常组和假手术组可以检测到少量的FADD mRNA和蛋白表达；模型组FADD mRNA和蛋白表达变化一致，均在再灌注6小时开始上升，12小时达到高峰，以后时间点逐渐下降；与模型组比较，参芎注射液干预能使其mRNA和蛋白表达显著减弱(P<0.05～0.001)。(5)正常组和假手术组几乎检测不到Caspase-8mRNA及蛋白的表达；模型组Caspase-8mRNA和蛋白表达变化基本一致，均于再灌注6即小时开始上升，12小时达高峰，以后时间点逐渐下降；与模型组比较，参芎注射液干预能使其mRNA和蛋白表达显著减弱(P<0.05～0.001)。(6)正常组和假手术组可以检测到微量的FLIP mRNA和蛋白表达；模型组肿mRNA表达在再灌注6小时明显上升并达高峰，其蛋白表达亦于6小时开始增加，并达高峰，以后时间点逐渐下降；与模型组比较，参芎注射液干预能增强FLIPmRNA和蛋白表达(P<0.05)。 结论：(1)促凋亡因子FADD和Caspase-8的表达增强，可能参与大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡过程。(2)抗凋亡因子FLIP出现短暂的表达增强，可能参与抑制大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡。(3)参芎注射液干预能使大鼠脑缺血再灌注后FADD、Caspase-8mRNA和蛋白表达减弱，FLIP mRNA和蛋白表达增强，细胞凋亡减轻，可能是其脑保护作用机制之一。