8-溴-7-甲氧基白杨素对人小细胞肺癌NCI-H446细胞生长和凋亡的影响

摘要

目的：观察8-溴-7-甲氧基白杨素(BrMC)抑制人小细胞肺癌（NCI-H446）细胞生长以及诱导凋亡作用，为寻找具有开发前景的肺癌治疗活性新化学实体提供理论和实验依据。
　　方法：以体外培养的人小细胞肺癌NCI-H446细胞和中国仓鼠肺上皮CHL细胞为研究对象。采用溴化四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测BrMC对NCI-H446细胞和CHL细胞活性的影响；平皿集落形成法测定NCI-H446细胞集落形成能力；PI染色流式细胞术（FCM）分析NCI-H446细胞凋亡程度和细胞周期分布；DNA琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯形条带；间接免疫荧光FCM检测BrMC对NCI-H446细胞Noxa, Mcl-1和Caspase-3蛋白的表达水平。
　　结果：(1) MTT比色法结果显示，不同浓度的BrMC（0.3,1.0,3.0,10.0,30.0μM）及30.0μM的ChR分别处理NCI-H446细胞48小时后，其相对细胞活性抑制率（IR）分别为13.87％、22.14%、39.05%、51.97%、61.14%和48.54%,呈浓度依赖性。30.0μM的BrMC的IR较30.0μM的ChR的IR高(P＜0.05)。BrMC对CHL细胞活性的抑制作用（IC50为455.94μM）弱于其对NCI-H446细胞的作用（IC50为9.87μM），其对NCI-H446细胞的选择指数（SI）达46(455.94/9.87)；(2)平皿集落形成法结果显示，不同浓度的BrMC（0.3,1.0,3.0,10.0,30.0μM）对NCI-H446细胞集落形成的抑制率分别为9.9%、25.34%、39.63%、47.92%、61.4%；ChR30.0μM，DDP2μg/ml的集落抑制率分别是39.86%和78.57%；(3)PI染色FCM分析显示，0.3,3.0,30.0μM的BrMC作用NCI-H446细胞48h后，其凋亡率分别为8.83%,23.7%,34.9%,其中3.0,30.0μM组较ChR30.0μM(19.7%)高；同时G1期细胞百分率分别为(60.0±0.8)%、(68.4±1.5)%、(76.3±1.2)%，较空白对照组(43.6±1.25)%和30.0μM ChR(57.43±1.97)%高,呈现G1期阻滞现象。(4)DNA琼脂糖凝胶电泳结果显示BrMC处理NCI-H446细胞48h，琼脂糖凝胶电泳出现典型“梯形”DNA条带；（5）间接免疫荧光FCM分析结果显示：Noxa蛋白的平均荧光强度分别为(1.18±0.15)%、(1.64±0.19)%、(1.95±0.26)%,呈浓度依赖性地上升,表明BrMC可诱导Noxa蛋白的表达；Mcl-1蛋白的平均荧光强度分别为(0.22±0.05)%，(0.16±0.05)%，(0.15±0.09)%，呈浓度依赖性下降，表明BrMC可下调Mcl-1蛋白的表达；Noxa/Mcl-1比值分别为(5.6±2.2)%、(12.2±3.7)%、(19.5±4.5)%，呈浓度依赖性提升，表明BrMC可上调Noxa/Mcl-1比值。Caspase-3蛋白的平均荧光强度分别为(1.78±0.1)%、(2.61±0.2)%、(3.89±0.7)%，表达量亦呈浓度依赖性升高。
　　结论：
　　(1)BrMC具有抑制体外培养人小细胞肺癌NCI-H446细胞生长作用，呈浓度依赖性。
　　(2)BrMC能有效诱导人小细胞肺癌细胞NCI-H446细胞凋亡。
　　(3)BrMC诱导人小细胞肺癌细胞NCI-H446细胞凋亡的作用机制可能与提高Noxa/Mcl-1比值和激活Caspase-3相关。

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主要缩略英文索引

中文摘要

英文摘要

前 言

材料和方法

1 材料

2 方法

实 验 结 果

1 BrMC对人小细胞肺癌NCI-H446细胞活性的影响

2 BrMC对人小细胞肺癌NCI-H446细胞锚定依赖性生长的影响

3 DNA琼脂糖凝胶电泳观察BrMC 诱导NCI-H446细胞凋亡作用

4 BrMC对NCI-H446细胞凋亡率及细胞周期的影响

5 BrMC对NCI-H446细胞Noxa蛋白表达的影响

6 BrMC对NCI-H446细胞Mcl-1蛋白表达的影响

7 BrMC对NCI-H446细胞Caspase-3蛋白表达的影响

讨论

结论

参考文献

小细胞肺癌的治疗现状

攻读硕士学位期间完成、发表论文情况

致谢