低分子肝素时段干预高脂血症大鼠急性坏死性胰腺炎PAF、ET-1/NO、TXA2/PGI2的研究

摘要

目的：研究不同时段 LMWH干预对高脂血症大鼠急性坏死性胰腺炎血 PAF、ET-1/NO、TXA2/PGI2的影响，统计大鼠72h生存率，为临床LMWH治疗高脂血症性重症急性胰腺炎（hyperlipidemia severe acute pancreatitis，HL-SAP）的最佳时机选择提供理论依据和实验基础。
　　方法：健康雄性SD大鼠160只，随机分成A组（实验组），n=64；B组（对照组）,n=64；C组（假手术组）,n=32。三组大鼠高脂饲料喂养四周后，A、B两组各随机分为0h（n=16）、6h（n=16）、12h（n=16）、18h（n=16）四个时段组。A、B两组大鼠均行5％牛磺胆酸钠(0.1ml/100g)逆胰胆管注射法建立ANP模型，C组大鼠开腹仅翻动十二指肠。A0h、A6h、A12h、A18h组大鼠于ANP成模后分别皮下注射（subcutaneous injection,SI）LMWH0.2ml/100g/次(100IU/kg/次)，各时段均间隔6h重复注射一次，至成模后24h。B0h、B6h、B12h、B18h组大鼠ANP成模后采用同法分别皮下注射等量生理盐水(normal saline,NS)。A、B、C三组大鼠均在ANP建模后24h再随机等数分成两部分，一部分半数量大鼠开腹观察腹水、皂化斑以及胰腺大体改变，取门静脉血检测 PAF、ET-1、NO、TXB2（TXA2）、6-Keto-PGF1α（PGI2）、AMY以及血Ca2+浓度，取胰腺组织HE染色病理学检查并进行胰腺组织病理学评分，透射电镜观察胰腺微血管血栓；另一部分半数量大鼠继续皮下注射NS观察72h生存时间。
　　结果：
　　（1）甘油三酯（TG）：高脂饲料喂养四周后，进行喂养前后比较，A、B、C三组大鼠TG浓度分别为1.590±0.321mmol/L、1.603±0.257mmol/L、1.597±0.238mmol/L，均高于喂养前A组0.492±0.051mmol/L(P<0.01)、B组0.501±0.094mmol/L(P<0.01)及C组0.526±0.051mmol/L(P<0.01)。
　　（2）腹腔大体情况：A、B组大鼠ANP成模后24h开腹，B组大鼠腹腔内可见血性腹水和皂化斑形成，胰腺片状出血、坏死；A组大鼠腹腔内可见淡黄色腹水、点状皂化斑，胰腺点状出血坏死；SO组未见上述改变。
　　（3）血Ca2+、AMY：A组大鼠各时段组血Ca2+浓度均高于B组大鼠相应各时段组血Ca2+浓度（P<0.01）；A组大鼠各时段组血AMY浓度均低于B组大鼠相应各时段组血AMY浓度（P<0.05）。
　　（4）血 PAF：A组大鼠各时段组血PAF浓度均低于B组相应各时段组血PAF浓度（P<0.01）；A0h（5.5596±0.5738 ng/ml）、A6h（5.3424±0.1497ng/ml）血PAF浓度均低于A12h（6.3309±0.3731ng/ml）（P<0.01）、A18h（6.4671±0.3153 ng/ml）（P<0.01）时段组血PAF浓度；B组大鼠时段组内PAF浓度比较无显著性差异（P>0.05）。
　　（5）血ET-1、NO及ET-1/NO（E/N）：A组各时段组大鼠血ET-1、NO浓度及E/N比值均低于B组相应各时段组（P<0.01）；A0h（105.5882±2.6904ng/ml）、A6h（106.8563±1.9186ng/ml）时段组ET-1浓度均低于A12h（133.1583±1.7929 ng/ml）（P<0.01）、A18h（134.9255±0.5946ng/ml）（P<0.01）时段组ET-1浓度；A0h（3.3245±0.1963）、A6h（3.2851±0.0755）时段组E/N比值均低于A12h（3.7268±0.0828）（P<0.01）、A18h（3.8107±0.0677）（P<0.01）时段组E/N比值；B组大鼠时段组内NO浓度比较无显著性差异（P>0.05）。
　　（6）血TXB2、6-Keto-PGF1α及TXB2/6-Keto-P GF1α（T/P）：A组大鼠各时段组血TXB2、6-Keto-PGF1α浓度及T/P比值均低于B组相应各时段组（P<0.01）；A0h（82.735±2.058 pg/ml）、A6h（87.239±2.971pg/ml）时段组TXB2浓度均低于A12h（113.750±5.076pg/ml）（P<0.01）、A18h（112.392±4.526pg/ml）（P<0.01）时段组TXB2浓度；A0h（1.213±0.036）、A6h（1.326±0.041）时段组T/P比值均低于A12h（1.848±0.089）（P<0.01）、A18h（1.828±0.091）（P<0.01）时段组T/P比值；B组大鼠时段组内6-Keto-PGF1α浓度比较无显著性差异（P>0.05）。
　　（7）HE染色胰腺组织病理学检查及病理学评分：A组大鼠可见胰腺组织水肿，点状出血及坏死，少量炎症细胞浸润；B组大鼠可见胰腺组织水肿、片状出血及坏死，大量炎症细胞浸润；SO组无上述改变。A组大鼠各时段组胰腺组织病理学评分均低于B组大鼠相应各时段组（P<0.01）；A0h(5.375±0.517)、A6h（5.625±0.518）时段组胰腺组织病理学评分均低于A12h（8.625±0.518）（P<0.01）、A18h（8.375±0.517）（P<0.01）时段组病理学评分；A、B、C三组大鼠胰腺组织病理学评分与血PAF浓度、E/N比值、T/P比值的相关系数r分别为0.891、0.841和0.868，均呈正相关（P<0.01）。
　　（8）透射电镜观察：A组大鼠胰腺腺泡细胞空泡化少见，点状坏死，微血管血栓少见；B组大鼠可见胰腺腺泡细胞空泡化、坏死，胰腺微血管内皮细胞连接不完整，微血管血栓多见；SO组未见上述改变。
　　（9）生存时间：A组大鼠48h生存率62.50%，、72h生存率43.75%，高于B组大鼠48h（34.38%）（P<0.05）及72h（15.63%）（P<0.05）生存率，但低于SO组48h(100%)（P<0.01）及72h（100%）（P<0.01）生存率。
　　结论：
　　（1）实验组大鼠血PAF、ET-1、NO、TXA2以及PGI2浓度降低，胰腺微血管血栓减少，胰腺组织病理学评分降低，提示LMWH可改善HL大鼠ANP胰腺微循环。
　　（2）实验组大鼠各时段中，0h、6h时段组LMWH干预后PAF、ET-1、TXA2浓度及胰腺组织病理学评分均低于12h、18h时段组，提示LMWH早期干预较延期干预效果更好。
　　（3）实验组大鼠48h、72h生存率均高于对照组，提示应用LMWH干预可延长大鼠生存时间。

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引 言

1.实验材料

1.1 实验动物

1.2 实验仪器与实验设备

1.3 实验药物

1.4 实验试剂

2.实验方法

2.1 实验动物分组

2.2 动物模型建立

2.3 标本采集

2.4 标本检测

2.5 胰腺病理组织光镜观察

2.6 胰腺组织病理学评分

2.7 胰腺病理组织透射电镜观察

2.8 统计学处理

结 果

3.1 腹腔大体观察

3.2甘油三酯（TG）浓度变化

3.3 血淀粉酶浓度变化

3.4 血钙浓度变化

3.5血PAF浓度变化

3.6 血ET-1、NO浓度及ET-1/NO比值变化

3.7 血TXB2、6-Keto-PGF1α浓度及TXB2/6-Keto-PGF1α变化

3.8 胰腺病理组织学（光镜观察）

3.9胰腺病理组织学（透射电镜观察）

3.10 胰腺组织病理学评分

3.11 相关性分析

3.12 生存时间

讨 论

结 论

附 图

参考文献

综述

在读期间发表论文

致谢