苦参碱对博来霉素致肺纤维化大鼠模型HO-1、TN F-α表达的影响

摘要

目的
　　在博来霉素诱导的大鼠肺纤维化模型中,探讨血红素氧合酶-1(HO-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在肺纤维化中的表达情况,及苦参碱对其表达影响。
　　方法
　　90只健康雄性SD大鼠。随机分为5组,分别为正常对照组、模型组、泼尼松处理组、苦参碱低剂量组、苦参碱中剂量组。气管内给予博莱霉素(5 mg.g-1)制作肺纤维化动物模型。正常对照组气管内给予等体积溶媒(生理盐水)。建模后第1d起,分别根据组别予以泼尼松(0.56 mg.g-1.d-1)、不同剂量的苦参碱(50mg.g-1.d-1、100mg.g-1.d-1)及溶媒每天灌胃一次。于造模第7、14、28d时,每次各组随机处死6只大鼠取肺组织,检测肺组织匀浆中丙二醛(malondialdehyde,MDA)浓度、羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)含量;RT-PCR法检测肺组织HO-1、TNF-αmRNA的表达;Western blot法检测肺组织HO-1,ELISA检测 TNF-α产生情况;肺组织病理切片行HE、Masson染色。
　　结果
　　1、病理切片显示:模型组7d以炎症反应为主,可见肺成纤维细胞;14d可见大量炎症细胞,许多肺成纤维细胞,Masson染色见有胶原,肺纤维化开始形成;28d可见大量的肺成纤维细胞,肺泡部分出现挤压,Masson染色见有更多胶原沉积,说明肺纤维化模型已形成。各处理组的病理变化与模型组的病理改变相似,但程度均较模型组轻,其中以苦参碱中剂量组与泼尼松处理组减轻明显。
　　2、MDA及HYP含量:与空白对照组比,模型组、泼尼松组、苦参碱低剂量组、苦参碱中剂量组均升高(p<0.05),以模型组最明显(p<0.01);予以苦参碱及泼尼松干预以后,二者含量均有下降,以28d时改变最明显,与模型组相比,其中苦参碱中剂量组与泼尼松组改变最明显(p<0.05)。
　　3、RT-PCR、Western blot及ELISA显示:在正常肺组织中,HO-1处于低表达状态,TNF-α有表达。肺纤维化时,肺组织中二者的含量较正常组织明显上升(p<0.01),予以药物干预以后,与模型组相比,苦参碱低剂量组、苦参碱中剂量组与泼尼松组增加水平均有下降(p<0.05),以苦参碱中剂量组和泼尼松组明显。
　　结论
　　1、苦参碱具有抗肺纤维化形成的作用,且与剂量有关。
　　2、苦参碱抗肺纤维化的机制可能与调节机体氧化抗氧化失衡,抑制TNF-α的产生以及改变HO-1的表达水平有关,降低肺组织中MDA、HYP含量。

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主要缩略语

中文摘要

英文摘要

前言

实 验 材 料

1 实验动物及饲料

2实验药物

3 主要试剂TRIZOL试剂

4 主要仪器设备

实 验 方 法

1 建立动物模型

2 标本的采集与处理

3 观察指标及方法

4 统计学分析

实 验 结 果

1 肺组织病理变化

2 丙二醛的测定结果

3 羟脯氨酸的测定结果

4 TNF-α 的表达

5 Western blot 检测 HO-1蛋白水平的结果

6 RT-PCR检测 m RNA 的表达结果

讨论

1 苦参碱对大鼠MDA、HYP 含量的影响

2 苦参碱对大鼠HO-1表达的影响

3 苦参碱对大鼠TN F-α表达的影响

结论

参考文献

附图

综述

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