LAMP快速检测日本血吸虫感染性钉螺、卡氏肺孢子虫及恶性疟原虫的研究

摘要

目的：利用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification.LAMP)快速检测日本血吸虫(Schistosoma japonicum)感染性钉螺、卡氏肺孢子虫（Pneumocystis carinii）、恶性疟原虫（Plasmodium falciparum）的研究。
　　方法：以日本血吸虫、卡氏肺孢子虫、恶性疟原虫的特异基因为靶序列，利用Primer Explorer V3软件分别设计扩增靶基因的4条LAMP引物，酚氯仿法分别提取三种病原体的DNA，取适量模板DNA加入配制并优化好的LAMP反应体系，65℃下60 min，完成对靶病原体基因的扩增，通过肉眼观察、SYBR Green I染色及电泳来判定扩增结果。LAMP扩增产物经酶切进一步鉴定；设立对照组评价特异性；10倍系列稀释模板检测LAMP敏感性。
　　结果：模板经LAMP扩增后，肉眼、SYBR Green I染色和电泳均能观察到LAMP扩增产物的出现，电泳后呈LAMP特征性梯状条带，对照组均无扩增产物；三种病原体LAMP扩增产物经相应限制性内切酶酶切鉴定正确；结果显示三种病原体LAMP检测方法特异；LAMP可检测到日本血吸虫、卡氏肺孢子虫、恶性疟原虫的敏感性分别是1pgDNA/μL，1pgDNA/μl，1.5个疟原虫/107RBC，高于或与PCR敏感性相当。
　　结论：建立了日本血吸虫、卡氏肺孢子虫、恶性疟原虫特异、敏感和快速的LAMP检测方法。

目录

封面

声明

目录

主要缩略语英文索引

中文摘要

英文摘要

前 言

第一章 LAMP快速检测血吸虫感染性钉螺的研究

第一节 LAMP检测日本血吸虫尾蚴的研究

材料和方法

实验结果

讨 论

第二节 LAMP快速检测血吸虫感染性钉螺的研究

材料与方法

实 验 结 果

讨 论

第二章 LAMP快速检测卡氏肺孢子虫的研究

材料与方法

实 验 结 果

讨 论

第三章 LAMP快速检测恶性疟原虫的研究

材料与方法

实 验 结 果

讨 论

结论

参考文献

文献综述

参考文献：

研究成果及发表论文

致谢