二烯丙基二硫下调LIMK1抑制人胃癌细胞增殖、迁移及侵袭

摘要

目的：
　　我们先前证明二烯丙基二硫（diallyl disulfide，DADS）可明显抑制人胃癌细胞增殖，并且蛋白质组学研究发现DADS诱导人胃癌MGC803细胞的差异蛋白质LIMK明显下调。近年来，LIMK1对肿瘤细胞的增殖和侵袭的意义引起了广泛关注。本研究旨在探讨DADS对人胃癌MGC803细胞LIMK1的表达及其信号通路的影响，以阐明其抗肿瘤细胞增殖、侵袭和转移的分子机制。
　　方法：
　　DADS作用人胃癌MGC803细胞后，采用MTT比色法检测对增殖影响；Transwell实验和划痕实验分别观察DADS对细胞侵袭和迁移能力的影响；免疫组化检测LIMK1的表达；RT-PCR、Western blot分别检测Rac1、Rock1、Pak1、LIMK1、cofilin1和Destrin的mRNA与蛋白表达。
　　结果：
　　1. DADS对人胃癌MGC803细胞的增殖、侵袭和迁移具有抑制作用
　　MTT法检测结果显示，30 mg·L-1 DADS作用MGC803细胞24h、48h、72h、96h后，其吸光度值比对照组低，而且随时间增加逐渐降低(P<0.05)；随着时间增加，DADS对癌细胞增殖的抑制率逐渐增加，依次为31.8％，66.1%，83.6%，89.2%(P<0.05)，表明DADS对人胃癌细胞具有明显的生长抑制作用，且呈显著的时间-效应依赖关系（P<0.05）。
　　划痕实验结果显示，10、20、30、40、50 mg·L-1 DADS分别作用 MGC803细胞，取0小时和24小时观察划痕愈合情况，对照组划痕愈合显著快于DADS处理组，证明细胞的迁移能力被抑制，呈剂量-效应依赖关系（P<0.05）。Transwell实验结果显示，10、20、30、40、50 mg·L-1 DADS分别作用MGC803细胞24h后，随机取10个高倍视野进行穿过基质胶的细胞计数，处理组分别为35.8±3.74、34.1±2.02、31.7±4.81、17.2±3.08、13.2±3.36个，较对照组39.5±2.99个明显减少，呈剂量依赖性（P<0.05）。
　　2. DADS对人胃癌MGC803细胞LIMK1的表达具有下调作用
　　RT-PCR结果显示，30 mg·L-1 DADS与MGC803细胞作用48h后，LIMIK1 mRNA水平明显下调。Western blot显示，30 mg·L-1 DADS分别与MGC803细胞作用6、12、24、48 h后，LIMK1蛋白的表达水平呈时间依赖性下降，表明DADS可抑制人胃癌MGC803细胞LIMK1蛋白的表达。免疫组化检测显示30 mg·L-1 DADS分别与MGC803细胞作用6、12、24、48 h后，LIMK1蛋白的表达呈时间依赖性下降。
　　3. DADS可抑制cofilin1的磷酸化水平，但对Destrin的表达无影响
　　RT-PCR和 Western blot结果均显示30 mg·L-1 DADS对 MGC803细胞cofilin1的表达没有影响，但Western blot显示，30 mg·L-1 DADS作用MGC803细胞6、12、24、48 h后，cofilin1的磷酸化水平呈时间依赖性地下降。另外，RT-PCR和Western blot结果显示30 mg·L-1 DADS对Destrin的表达没有影响。
　　4. DADS对Rac1-Rock1/Pak1通路具有抑制作用
　　RT-PCR显示，DADS(30 mg·L-1)作用48 h后，可在mRNA水平上抑制MGC803细胞Rac1、Rock1、Pak1的表达。Western blot显示DADS(30 mg·L-1)作用MGC803细胞6、12、24、48 h后，Rac1、Rock1、Pak1蛋白表达水平呈时间依赖性地下降。
　　结论：
　　1. DADS可抑制人胃癌MGC803细胞增殖、迁移与侵袭能力。
　　2. DADS抗肿瘤细胞增殖、迁移与侵袭的机制与其下调LIMK1的表达，进而抑制cofilin1的磷酸化有关。
　　3. DADS是通过阻断Rac1-Rock1/Pak1通路而抑制MGC803细胞LIMK1的表达。

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本研究基金资助项目

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中文摘要

英文摘要

前 言

材料与方法

1 材料

2. 实验方法

结 果

1. DADS对人胃癌MGC803细胞的增殖、侵袭和转移具有抑制作用

2. DADS对人胃癌MGC803细胞LIMK1表达影响

3. DADS可抑制cofilin1的激活

4. DADS不影响Destrin的表达

5. DADS对Rac1表达的抑制作用

6. DADS对Rock1表达的抑制作用

7. DADS对Pak1表达的抑制作用

讨 论

1. DADS对肿瘤细胞LIMK1表达的抑制作用

2. DADS可能是通过抑制LIMK1，进而下调cofilin1的功能而发挥抗肿瘤作用

3. DADS抑制LIMK1表达可能与其阻断Rac1-Rock1/Pak1通路有关

结 论

参考文献

综述

读硕期间撰写的论文

英文缩写注解

致谢