硫化氢对大鼠蝮蛇毒致急性肺损伤组织炎症细胞因子的影响

摘要

目的：
　　观察增加或减少H2S的生成对蝮蛇毒致大鼠ALI时组织炎症细胞因子、核内转录因子（NF-κB)和粘附分子（ICAM-1)变化的影响，探讨H2S在蝮蛇毒致ALI炎症过程中的作用机制。
　　方法：
　　1.分组：将健康成年雄性 SD大鼠36只采用完全随机设计分为6组，每组6只，分别为Control组，空白对照组；S组，蝮蛇毒素组(注射剂量：1.5mg/kg)；S+ls组，蝮蛇毒素+低剂量NaHS组(注射剂量：0.78mg/kg)；S+ms,蝮蛇毒素+中剂量NaHS组(注射剂量：1.56mg/kg)；S+hs,蝮蛇毒素+高剂量NaHS组(注射剂量：3.12mg/kg)；S+PPG组，蝮蛇毒素+炔丙基甘氨酸组(注射剂量：30mg/kg)。
　　2.方法：将Control组和剩余组分别腹腔注射生理盐水和蝮蛇毒素3h后，Control组和S组、S+ls、ms、hs组及S+PPG组分别各自腹腔注射生理盐水、低中高剂量NaHS以及PPG，待注射腹蛇毒素6h后处死大鼠留取大鼠肺组织标本和采集保存血浆。观察光镜下肺组织病理学变化并进行大鼠肺损伤病理评分（HE染色）；测定血清中IL-1β和IL-10含量（ELISA法)；测定肺组织中IL-1β、IL-10和ICAM-1mRNA水平变化（RT-PCR法)；测定肺组织 NF-κBp65的蛋白表达（western-blot法)。
　　结果：
　　1.光镜肺组织病理学变化及肺损伤病理评分（IQA)：
　　同Control组正常肺组织结构相比较，S组肺组织中间隔增厚，炎性细胞浸润及红细胞漏出溶解，可见部分肺泡透明膜形成，存在肺泡塌陷，肺组织结构完整性明显破坏，肺损伤病理评分（IQA）明显升高（P＜0.01）。与S组比较，S+ls组肺损伤未见改善（P＞0.05），S+ms组，S+hs组肺损伤较前减轻，但仍可见肺组织间隔增厚，少量炎性细胞浸润，及少量红细胞漏出，肺泡腔内透明膜较前减少，肺泡结构尚完整，IQA显著下降（P＜0.01），但比Control组仍有明显肺损伤；S+PPG组肺损伤明显加重，广泛透明膜形成，肺泡塌陷及肺不张，IQA升高（P＜0.05）。
　　2.血清中IL-1β、IL-10含量的变化
　　①蝮蛇毒组与空白对照组比较血清中IL-1β、IL-10浓度表达显著升高（P＜0.01）；
　　②蝮蛇毒+NaHS中、高剂量组血清中IL-1β浓度与蝮蛇毒组比较明显降低；低剂量组变化不明显（P＞0.05）；
　　③蝮蛇毒+NaHS中、高剂量组血清中IL-10浓度明显升高（P＜0.05或P＜0.01）。低剂量组变化不明显（P＞0.05）；
　　④蝮蛇毒+PPG组血清中IL-1β浓度与蝮蛇毒组比较明显升高，IL-10浓度与蝮蛇毒组比较明显降低（P＜0.05或P＜0.01）。
　　3.肺组织ICAM-1、IL-1β、IL-10 mRNA基因表达的变化
　　①蝮蛇毒组与空白对照组比较，肺组织中ICAM-1、IL-1β、IL-10 mRNA基因表达均显著升高（P＜0.01）；
　　②蝮蛇毒+NaHS低、中、高剂量组肺组织中IL-1β和ICAM-1mRNA基因表达与蝮蛇毒组比较明显降低（P＜0.05或P＜0.01）。；
　　③蝮蛇毒+NaHS中、高剂量组肺组织中IL-10 mRNA基因表达与蝮蛇毒组比较明显升高（P＜0.05），低剂量组变化不明显（P＞0.05）；
　　④蝮蛇毒+PPG组肺组织中IL-1β、ICAM-1 mRNA基因表达与蝮蛇毒组比较明显升高，肺组织中IL-10 mRNA基因表达与蝮蛇毒组比较明显降低（P＜0.05）。
　　4. NF-κB p65蛋白表达的变化
　　①蝮蛇毒组与空白对照组比较，肺组织中NF-κBp65蛋白表达显著升高（P＜0.01）；
　　②蝮蛇毒+NaHS高剂量组 NF-κBp65蛋白表达与蝮蛇毒组比较明显降低（P＜0.05），中、低剂量组变化不明显（P＞0.05）；
　　③蝮蛇毒+PPG组与蝮蛇毒组比较NF-κBp65蛋白表达明显升高（P＜0.05）。结论：
　　1.外源性增加H2S，可以使蝮蛇毒染毒后大鼠IL-1β、ICAM-1基因表达和NF-kBp65蛋白表达下降，IL-10mRNA基因表达增高，肺损伤病理评分下降。
　　2. H2S通过抑制促炎因子释放，提高抗炎因子浓度，减轻蝮蛇毒致大鼠急性肺损伤的损伤程度。

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引言

实验材料与方法

1. 实验材料

1.1实验动物

1.2实验试剂

1.3 仪器

2.实验方法

2.1实验动物分组

2.2建立实验动物模型

2.3 标本采集

2.4检测指标和方法

3 统计学处理

实验结果

1.实验大鼠一般情况：

2.肺组织病理学变化

2.1 大体肉眼观

2.2镜下观（光镜）及肺损伤病理评分

3. 血清中 IL-1β、IL-10 含量的变化（表 7, 图 14）

4. 肺组织ICAM-1、IL-1β、IL-10 mRNA 基因表达的变化(表 7,8,图 15)

5. NF-κB p65 蛋白表达的变化（表 8，图 16）

讨论

1.蝮蛇毒与急性肺损伤

2.急性肺损伤与组织炎症细胞因子

3.硫化氢与急性肺损伤及炎症细胞因子的关系

结论

参考文献

综述：

参考文献

研究生期间发表论文及获奖情况

1. 研究生期间发表的论文

2.研究生期间获奖情况

致谢