tBHQ通过Nrf2/HO-1信号途径上调THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1的表达

摘要

背景与目的：叔丁基对苯二酚（tBHQ）是一种合成的多酚类抗氧化剂，在体内能激活红系衍生的核因子相关因子2（Nrf2）。血红素氧合酶-1（HO-1）是 Nrf2的靶基因，研究显示Nrf2/HO-1的激活有抗炎抗氧化及防止动脉粥样硬化(As)发生的作用。三磷酸腺苷结合盒转运体A1（ABCA1）是一种重要的膜蛋白转运体，能介导细胞内胆固醇流出，减少泡沫细胞形成，发挥抗As的作用。但tBHQ与ABCA1表达之间是否存在联系尚不清楚。本研究选取THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象，探讨tBHQ对ABCA1表达，以及细胞内胆固醇流出的影响，并研究其作用的主要机制。
　　方法：用ox-LDL诱导形成THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞，以此细胞模型进行实验：实时定量PCR和Western blot方法检测不同浓度tBHQ（0,25,50,100,200μM）处理细胞24 h及tBHQ处理不同时间（0,6,12,24,48 h）后ABCA1的表达情况，高效液相色谱检测细胞内胆固醇含量，液体闪烁计数器检测细胞胆固醇流出；外源性加入calpain处理细胞，观察tBHQ对细胞内ABCA1蛋白水平的影响，转染siRNA或加入相应抑制剂抑制Nrf2或HO-1表达，用Western blot方法检测tBHQ处理24 h后ABCA1等的表达情况，calpain活性试剂盒检测calpain活性。
　　结果：tBHQ以时间及剂量依赖性上调细胞内 ABCA1蛋白水平及胆固醇流出（P<0.05），但对其mRNA水平无显著影响。进一步研究发现tBHQ能剂量依赖性降低calpain的活性（P<0.05），而加入外源性的calpain，ABCA1蛋白水平明显下降，加入tBHQ则能显著延缓ABCA1的蛋白降解（P<0.05）。采用HO-1抑制剂或转染siRNA抑制HO-1表达，tBHQ上调ABCA1蛋白表达及抑制calpain活性的作用随之取消（P<0.05），加入Nrf2 siRNA也观察到类似结果，说明Nrf2和HO-1在tBHQ调节ABCA1蛋白水平中发挥重要作用。
　　结论：在THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞中，tBHQ通过激活Nrf2/HO-1信号通路抑制calpain活性，减少ABCA1的蛋白降解，从而增加ABCA1的蛋白水平，促进细胞内胆固醇流出。

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