内源性硫化氢涉及肝癌细胞HepG-2热耐受性的形成

摘要

【目的】：
　　建立耐热肝癌细胞株（HepG-2/thermotolerance,HepG-2/tt）后，探讨其细胞内内源性硫化氢的生成和含量及合酶活性是否增加，以及内源性硫化氢生成酶的表达是否受到上调。
　　【方法】：
　　以普通肝癌细胞 HepG-2为细胞模型，在43℃水浴环境下培养4小时后建立了耐热肝癌细胞株（HepG-2/tt）。设 HepG-2细胞和HepG-2/tt细胞两组，然后将 HepG-2细胞和HepG-2/tt细胞同时放入43℃水溶环境下培养4小时后通过台盼蓝染色（Trypan blue dye exclusion）检测 HepG-2和HepG-2/tt的细胞活力； Hoechst33258染色、PI流式细胞仪检测细胞凋亡率；亚甲基蓝显色分光光度计法检测HepG-2细胞和HepG-2/tt细胞上清液中H2S含量和H2S合酶活性；Western Blot检测HepG-2和HepG-2/tt细胞中CBS、CSE和MPST的表达。
　　【结果】：
　　HepG-2和HepG-2/tt的细胞活力：HepG-2细胞的存活率是26.3％±0.8%， HepG-2/tt的存活率为72.6%±0.3%，两组间具有统计学意义（P<0.01）。
　　HepG-2和HepG-2/tt细胞凋亡率：HepG-2细胞凋亡率42.3%±2.6%，HepG-2/tt细胞凋亡率27.2%±0.5%，两组间具有统计学意义（P<0.01）。
　　HepG-2细胞和HepG-2/tt细胞两组细胞上清液中H2S的含量：HepG-2上清液中的硫化氢含量是0.08±0.016(nmol/mg.protein)，HepG-2/tt上清液中的硫化氢含量是0.143±0.009(nmol/mg.protein)。两组间具有统计学意义（P＜0.01）。
　　HepG-2细胞和HepG-2/tt细胞两组细胞中H2S合酶活性：HepG-2细胞中H2S合酶活性为0.309±0.017(nmol/min/mg.protein)，HepG-2/tt细胞中H2S合酶活性是0.549±0.018(nmol/min/mg.protein)，两组间具有统计学意义(P＜0.01)。HepG-2细胞和HepG-2/tt细胞中CBS、CSE和MPST的表达，耐热株中CBS、CSE、MPST的表达显著升高(P＜0.01)。
　　【结论】：
　　内源性H2S可能参与了耐热肝癌细胞HepG-2/tt的热耐受性。

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