烟酸姜黄素酯对血管平滑肌细胞增殖的影响及机制研究

摘要

目的：研究烟酸姜黄素酯（CurTn）通过Caveolin-1/ERK1/2/CyclinD1细胞分子信号通路对大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响。
　　方法：体外用DMEM培养VSMC，10％FBS刺激VSMC生长和增殖。MTT检测CurTn对VSMC增殖的影响。流式细胞术检测分析 CurTn对VSMC细胞周期的影响。Western Blot检测PCNA、Caveolin-1、p-ERK1/2、CyclinD1蛋白的表达，以及si-RNA沉默Caveolin-1后CurTn对p-ERK1/2蛋白表达的影响和PD98059预处理后CurTn对CyclinD1的影响。
　　结果：MTT检测发现，CurTn抑制VSMC增殖并具有一定的量效和时效关系。流式细胞术检测显示，CurTn加快细胞周期G1/S期转换，使G0/G1期的细胞比例显著性的增加，S期的细胞比例明显下降。Western Blot检测结果表明，CurTn可以促进Caveolin-1蛋白的表达，抑制p-ERK1/2、CyclinD1、PCNA蛋白的表达；Caveolin-1被沉默后，CurTn对p-ERK1/2蛋白表达的抑制作用减弱；PD98059可以减弱CurTn对CyclinD1蛋白表达的抑制作用。
　　结论：CurTn可通过增加Caveolin-1的表达，致使ERK1/2蛋白表达下降，进而引起CyclinD1蛋白的表达降低，加快细胞周期G1/S期转换,使细胞滞留在G0/G1期，从而抑制VSMC的增殖。

目录

封面

声明

目录

中文摘要

英文摘要

1 引言

2 实验材料

2.1药物来源

2.2 药物的配置

2.3主要试剂

2.4 主要仪器

3 实验方法

3.1 细胞培养

3.2 MTT实验

3.3 流式细胞术分析细胞周期

3.4 Western Blot分析蛋白表达

3.5 细胞si-RNA转染

3.4 统计分析

4实验结果

4.1烟酸姜黄素酯对VSMC增殖的影响

4.2 不同时间点(24、48、72h)烟酸姜黄素酯对VSMC增殖的影响

4.3 烟酸、姜黄素及烟酸姜黄素酯对VSMC的影响

4.4 联合应用烟酸和姜黄素及单用烟酸姜黄素酯对VSMC增殖的影响

4.5 烟酸姜黄素酯对VSMC细胞周期的影响

4.6 烟酸姜黄素酯影响VSMC增殖的机制探讨

5讨论

5.1 CurTn对VSMC增殖的影响

5.2 CurTn对VSMC的细胞周期的影响

5.3 CurTn对VSMC增殖影响的机制

6 结论

参考文献

附录

综述

成果目录

致谢