PBMC结核抗体分泌试验和酶联免疫斑点试验对活动性结核病临床诊断价值的研究

摘要

目的：研究外周血单个核细胞（PBMC）分泌结核抗体试验和酶联免疫斑点试验（ELISPOT）对活动性结核病（TB）的临床诊断价值。
　　方法：受试者共163例，包括活动性结核病患者104例（菌阳肺结核27例，菌阴肺结核61例，肺外结核16例）、结核分枝杆菌（MTB）潜伏感染者（LTBI）26例和健康对照（HC）33名。采用Ficoll密度梯度离心法分离受试者PBMCs，体外培养4 d后收集培养上清液，用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）和蛋白免疫印迹法（WB）检测 PBMCs培养上清液中抗原特异性结核抗体；用ELISPOT方法检测受试者早期分泌抗原靶6KDa蛋白（ESAT-6）、ESAT-6/培养滤出液蛋白-10（CFP-10）融合抗原刺激后产生γ-干扰素的T细胞水平；比较分析三种方法的敏感度、特异度、阳性预测值及阴性预测值。
　　结果：
　　1. ELISA法检测TB组特异性结核抗体的OD值高于LTBI组和HC组（p<0.001）；特异性结核抗体区分TB和LTBI、HC的曲线下面积（AUC）分别为0.857、0.944，当cut-off值为0.42时，区分TB和LTBI的敏感度为77.9％，特异度为80.8%，阳性预测值为94.2%，阴性预测值为47.7%；区分TB和HC的敏感度为77.9%，特异度为93.9%，阳性预测值为97.6%，阴性预测值为57.4%。
　　2. WB法检测活动性结核的敏感度为79.2%，特异度为100.0%，阳性预测值为100.0%，阴性预测值为40.7%（p<0.001）。
　　3. ELISPOT法检测活动性结核的敏感度为82.7%，特异度为87.9%，阳性预测值为95.6%，阴性预测值为61.7%（p<0.001）。
　　4. ELISA、WB和ELISPOT方法诊断活动性结核的敏感度、特异度、阳性预测值进行平行比较，差异均无统计学意义（p>0.05）；阴性预测值进行平行比较，WB法的阴性预测值低于ELISA法和ELISPOT法（p<0.05）；ELISA和ELISPOT法在菌阳组、菌阴组活动性肺结核的阳性检出率比较，差异均无统计学意义（p>0.05）。
　　5. ELISA、WB、ELISOPT法检测16例肺外结核的阳性率分别为81.3%、56.3%、68.8%。
　　结论：
　　1. PBMC结核抗体分泌试验的ELISA法，对活动性结核的诊断效能高，并可以区分活动性结核、结核分枝杆菌潜伏感染及健康人。
　　2. PBMC结核抗体分泌试验的免疫印迹法操作简便，诊断活动性结核的特异度高。
　　3.PBMC结核抗体分泌试验与ELISPOT法对活动性结核均具有较高的诊断价值，PBMC结核抗体分泌试验可以作为结核病实验室诊断的新方法。

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主要英文缩略语索引

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英文摘要

前言

材料和方法

实验材料

1.研究对象

2.主要试剂

3.主要仪器设备

4.主要试剂配制

实验方法

1.细菌检测方法

2.Ficoll密度梯度离心法分离外周血PBMCs

3.ELISA法检测特异性结核抗体

4.Western blot法检测特异性结核抗体

5.ELISPOT法检测IFN-γ释放水平

统计学分析

结果

1 .实验各组性别、年龄基本情况

2.ELISA法检测各组特异性结核抗体的OD值比较

3.特异性结核抗体诊断活动性结核的ROC曲线分析

4.Western blot检测与最终诊断结果的比较

5.ELISPOT试验与最终诊断结果的比较

6.三种方法检测活动性结核的敏感度及特异度比较

7.三种检测方法的阳性预测值及阴性预测值比较

8.ELISA法和ELISPOT法检测活动性肺结核患者的结果比较

9.三种方法检测肺外结核患者情况

讨论

结论

参考文献

综述

攻读硕士期间撰写的论文及参与课题

致谢