胃癌组织中TGFBR1基因突变及mRNA表达的研究

摘要

目的：研究TGFBR1在胃癌组织中的基因突变及mRNA表达情况，探索其在胃癌发生发展过程中的作用。
　　方法：应用PCR及Sanger双脱氧测序法检测20例胃癌组织中TGFBR1全部外显子的基因突变，并分析新发突变的突变位点与蛋白结构域的关系，对新发现的突变进行致病性分析；同时应用RT-PCR方法对20例胃癌组织和20例正常胃组织的TGFBR1表达进行检测。
　　结果：
　　1.本研究在6例标本中得到了TGFBR1外显子9的7个基因突变位点，其中包含3个错义突变：c.1470 G>A（p.R465K）; c.1491 G>A（p.R472K）; c.1493 G>A（p.E473K）、1个同义突变：c.1543 G>A（p.K489K）和3个位于TGFBR1基因3’非翻译区的突变位点：c.1624 G>A; c.1675 G>A; c.1684 G>A，均是第一次发现和报道。
　　2.突变位点与蛋白结构域的关系分析显示：其中4个基因突变位点（c.1470 G>A;c.1491 G>A; c.1493G>A;c.1543 G>A）均位于TGFBR1编码蛋白的丝氨酸-苏氨酸激酶区域，另3个基因突变位点（c.1624 G>A; c.1675 G>A; c.1684 G>A）均位于TGFBR1无特殊功能的细胞内区域。
　　3.TGFBR1的基因突变与胃癌患者的年龄、性别、分化程度、淋巴结转移及分期均无关（P>0.05）。
　　4.经RT-PCR方法检测发现，胃癌组织中TGFBR1的mRNA表达明显高于正常胃黏膜组（P<0.05）。Ⅲ/Ⅳ期组胃癌组织中TGFBR1的相对表达量高于Ⅰ/Ⅱ期组（P<0.05）。有淋巴结转移组胃癌组织中TGFBR1的相对表达量高于无淋巴结转移组（P<0.05）。TGFBR1的相对表达量与年龄、性别、胃癌的分化程度无明显关系（P>0.05）。
　　结论：
　　1.本实验在胃癌组织中发现7个未报道的TGFBR1基因突变位点。
　　2. TGFBR1 mRNA的高表达可能与胃癌的发生发展有关。

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主要缩略词及英文索引

中文摘要

英文摘要

前言

主要实验材料和仪器设备

1、组织

2、主要试剂

3、主要仪器及设备

实验方法

1、DNA的提取

1.1 实验样品的准备

1.2 DNA的提取

1.3 DNA纯度测定

2、PCR反应

2.1引物的设计与合成

2.2 PCR反应体系

2.3 PCR反应条件

2.4 PCR扩增产物的检测

3、DNA测序与分析

3.1 DNA测序

3.2 新发现突变的致病性分析

4、RT-PCR (逆转录-聚合酶链反应)

4.1 RNA的提取

4.2 cDNA的合成

4.3引物序列

4.4 RT-PCR反应

4.5 琼脂糖凝胶电泳

5、统计学分析

实验结果

1、总RNA的电泳

2、PCR扩增产物的电泳

3、胃癌组织中TGFBR1基因突变的分析

3.1 TGFBR1基因突变检测结果总结

3.2 TGFBR1基因测序结果图

3.3 突变位点与蛋白质结构域的关系

3.4 TGFBR1基因突变与胃癌部分临床病理特征关系

4、胃癌组织中TGFBR1 mRNA的表达分析

4.1胃癌组织和正常胃组织中TGFBR1的表达比较

4.2胃癌组织中TGFBR1的表达与临床病理特征的关系

讨论

结论

参考文献

综述

硕士期间发表的论文

致谢