人参果中非皂苷类活性物质的研究

摘要

本实验以深入开发利用人参果，研发具有增强免疫力、促进微循环、抗衰老、抗糖尿病、提高记忆力的药物为目的，对人参果中的非皂苷类活性物质AF、AFG、L-焦谷氨酸的提取、分离、鉴定和定量等方面进行系统的研究。 首次，从人参果中提取分离得到了AF、AFG。在前人基础上建立了新的分离体系。样品粉末用五倍量乙醇搅拌提取24小时，抽滤，弃去滤液，残渣加入10倍量双重蒸馏水，搅拌提取12小时，离心，取上清液，残渣继续加入双重蒸馏水，重复3次。合并三次提取后的离心上清液，减压浓缩至小体积，浓缩液过大孔树脂NKA柱层析，双重蒸馏水洗脱，收集水洗脱液冻干成粉末，置于冰箱中备用。3.0g冻干粉末溶于6mL双重蒸馏水中，过SephadexLH-20柱，双重蒸馏水洗脱(42mL/h)，收集含AFG和AF的部分，溶于0.2﹪冰醋酸水溶液中，使成为200mg/mL溶液，过Bio-gelP-2柱，以0.2﹪醋酸水洗脱，洗脱流速为18mL/h，收集含AF和AFG部分，过硅胶低压干柱，以正丁醇:冰醋酸:水(2:1:1)洗脱，即得AF、AFG。 采用反复聚丙烯酰胺(Bio-gel)柱层析从合成物中分离精氨酸衍生物AF、AFG，作为从人参果中分离AF、AFG的标准品。通过反复实验证实，已纯化的标准品随贮藏时间的延长和贮藏温度的升高，含量逐渐降低。因此，标准品贮藏于-40℃、干燥的环境为最佳。在减压浓缩的过程中，也必须严格控制温度低于45℃，否则发生转化。 采用薄层扫描法测定人参花和人参果中AF含量。具体条件如下：以正丁醇:冰醋酸:水(2:1:1)为展开剂，以0.2﹪茚三酮乙醇溶液为显色剂，AF的测定波长λs=510nm，参比波长λR=685nm。结果表明AF在1.00-3.50μg范围内线性关系良好，相关系数R2=0.999；平均回收率为99.77﹪(n=6)，RSD=1.34﹪。此方法简便，可靠，可用于人参花和人参果中的AF的含量分析。 首次从人参果中发现了L-焦谷氨酸，并采用大孔吸附树脂层析，SephadexLH-20柱层析，硅胶柱层析对该成分进行了提取分离。具体的提取分离条件如下：取人参果冻干粉末加10倍量蒸馏水超声提取3次，每次12h，合并提取液，离心(8000rpm30min)，收集上清液浓缩至一定体积(1000mL)，过大孔树脂NKA柱，用蒸馏水和20﹪乙醇洗脱，分别收集洗脱液。将水洗脱部分和20﹪乙醇洗脱部分分别上SephadexLH-20葡聚糖凝胶柱，均以水洗脱，部分收集器收集(42mL/h)，薄层层析硅胶G板检测洗脱组分，分别收集每个层析柱水洗脱的含有与L-焦谷氨酸同一Rf值的部分。将收集到的样品浓缩至干，加少量的甲醇溶解，用适量的粗硅胶拌匀，挥干溶剂，采用低压硅胶干柱分离，用洗脱剂n-BuOH:AcOH:H2O(6:2:2)洗脱至柱底，然后分段切出硅胶，挥干溶剂后，以水洗脱，然后用薄层层析检查，合并相同组分，再进行一次低压硅胶干柱层析，即得较纯的L-焦谷氨酸，纯度高达96.35﹪。 应用RP-HPLC法对人参地上各个部位中的L-焦谷氨酸进行了定量分析。具体条件如下：色谱柱：NucleosilC18.(5μm,150mm×4.6mmID)；流动相：MeOH:0.005NKAc水溶液(8:92)，溶剂系统流速为0.4mL/min紫外检测波长为210nm；柱温25℃；L-焦谷氨酸的保留时间为5.427min；经统计学计算其回归方程为Y=68498.7857X-183.36071，r=0.99915，L-焦谷氨酸在0.05-3.50mg/mL范围内浓度与色谱峰面积呈良好的线性关系，平均回收率为99.76﹪，RSD=1.67﹪。通过方法学考察，表明该法简便、灵敏、准确，可作为测定人参地上各个部位中的L-焦谷氨酸含量的有效方法。测定结果表明：人参地上各个部位中L-焦谷氨酸含量不尽相同，其含量由高到低依次为人参果＞人参花＞人参茎叶。 本文的创新点如下： 采用不同的提取、分离工艺路线，首次从人参果中发现并分离得到了3个单体化合物。通过物理常数、化学方法和波谱分析(13CNMR、1HNMR、UV、MS)方法进行了鉴定。 首次从人参花和人参茎叶中检测到了L-焦谷氨酸，并采用RP-HPLC法对人参地上各个部位(花、果、茎叶)中L-焦谷氨酸的含量进行了测定，对该测定方法进行了方法学考察，表明该法简便、灵敏、准确，可作为测定人参地上各个部位中的L-焦谷氨酸含量的有效方法。 首次从人参花中检测到了AF，并采用薄层扫描法测定了人参花和人参果中AF的含量。测定结果表明此方法简便、快速、可靠，可用于人参花和人参果中的AF的含量分析。

目录

文摘

英文文摘

独创性声明及关于论文使用授权的说明

前 言

第一章研究进展

第二章人参果中AFG、AF的提取、分离及鉴定

第三章薄层扫描法测定人参果和人参花中AF的含量

第四章人参果中L-焦谷氨酸的提取分离与鉴定

第五章RP-HPLC法测定人参地上各个部位中L-焦谷氨酸的含量

第六章结论

参考文献

附录

致谢

作者简历