LPS通过TLR4上调THP-1细胞SR-PSOX的表达及其对脂质的吞噬

摘要

目的:研究TLR4与SR-PSOX之间的关系,探讨LPS促动脉粥样硬化的可能机制。
　　方法:THP-1细胞经160nmol/L佛波酯孵育24小时,诱导成贴壁的巨噬细胞后,加入不同处理因素。实验1,用0ng/ml,1ng/ml,10ng/ml,100ng/ml,1000ng/ml的LPS处理 THP-1细胞,逆转录聚合酶链反应（reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测细胞 SR-PSOXmRNA表达,选出 LPS最佳作用浓度;再以最佳浓度LPS分别孵育THP-1细胞0h,3 h,6 h,12 h,24 h,RT-PCR法检测细胞SR-PSOXmRNA表达,选出LPS最佳作用时间。实验2,根据实验目的分为两部分:(1)经不同因素处理后,检测THP-1细胞SR-PSOX表达情况,实验分为PBS组,LPS组,IgG+LPS组,TLR4抗体+LPS组。10ug/ml抗体预处理THP-1细胞2小时,LPS孵育细胞3小时,应用RT-PCR和Western Blot检测细胞SR-PSOXmRNA及蛋白质表达;(2)经不同因素处理后,检测细胞内脂质蓄积情况,实验分为 oxLDL组,LPS+oxLDL组,IgG+LPS+oxLDL组,TLR4抗体+LPS+oxLDL组,10ug/ml抗体预处理THP-1细胞2小时,LPS孵育细胞3小时,再与30μg/mloxLDL孵育24小时,高效液相色谱法与油红O染色观察细胞内脂质含量。实验3,根据实验目的分为两部分,(1)经不同因素处理后,检测THP-1细胞TLR4表达情况,实验分为PBS组,LPS组,IgG+LPS组,SR-PSOX抗体+LPS组,2ug/ml抗体预处理THP-1细胞2小时,LPS孵育细胞3小时,应用RT-PCR法和Western Blot检测细胞TLR4mRNA与蛋白质表达情况。(2)经不同因素处理后,检测细胞内脂质蓄积情况,实验分为oxLDL组,LPS+oxLDL组,IgG+LPS+oxLDL组,SR-PSOX抗体+LPS+oxLDL组,2ug/ml抗体预处理 THP-1细胞2小时,LPS孵育细胞3小时,再与30ug/ml oxLDL孵育24小时,高效液相色谱法与油红O染色观察细胞内脂质含量。
　　结果:LPS上调SR-PSOX的mRNA表达,最佳作用浓度为100ng/ml,最佳作用时间为3小时。应用TLR4抗体封闭其功能后,SR-PSOXmRNA和蛋白表达下调,与LPS组相比,差异有统计学意义(p<0.05);油红O染色细胞内红染脂滴减少,高效液相显示脂质含量降低,与LPS+oxLDL组相比,差异有统计学意义(p<0.05)。应用SR-PSOX抗体封闭其功能后,TLR4的mRNA及蛋白表达与阻断前相比均有一定程度降低,但差异无统计学意义;高效液相色谱与油红O染色均表明细胞内脂质含量减少,与LPS+oxLDL组相比,差异有统计学意义(p<0.05)。
　　结论:1.LPS刺激可以上调THP-1细胞SR-PSOX的表达;用TLR4抗体后,LPS上调THP-1细胞SR-PSOX的作用明显减弱。说明LPS通过TLR4上调THP-1细胞SR-PSOX的表达。
　　2.LPS刺激可以增加THP-1细胞对oxLDL的吞噬;用TLR4抗体后,LPS刺激的THP-1细胞吞噬脂质减少。说明LPS通过TLR4上调THP-1细胞SR-PSOX对脂质的吞噬。

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前言

材料与方法

1． 材料与方法

2.实验方法

实验结果

实验一 LPS对THP-1细胞SR-PSOX mRNA表达的影响

1. 不同浓度LPS对THP-1细胞SR-PSOX mRNA表达的影响

2. LPS作用不同时间对THP-1细胞SR-PSOX mRNA表达的影响

实验二 TLR4抗体对THP-1细胞SR-PSOX表达及细胞脂质蓄积的影响

1．TLR4抗体对THP-1细胞SR-PSOXmRNA及蛋白表达的影响

2. TLR4抗体对THP-1细胞脂质蓄积的影响

实验三 SR-PSOX抗体对THP-1细胞TLR4表达及细胞脂质蓄积的影响

1. SR-PSOX抗体对THP-1细胞TLR4 mRNA及蛋白表达的影响

2. SR-PSOX抗体对THP-1细胞脂质吞噬的影响

讨论

结论

参考文献

文献综述

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