氨氯地平对oxLDL诱导HUVEC-12细胞株CD40表达的影响及其机制

摘要

研究背景:CD40信号途径在介导炎症细胞活化和体液免疫过程中起着重要作用,研究发现活化的内皮细胞存在CD40高表达并介导多种炎症因子表达,参与动脉粥样硬化(As)斑块形成、发展及破裂的诸多环节。课题组的早期研究发现钙通道阻滞剂(CCB)类药物具有显著的抗As作用,这种作用并不完全依赖于降压效应,但具体机制仍不清楚。本研究拟观察第三代钙通道阻滞剂氨氯地平对血管内皮细胞CD40表达的影响,初步探讨氨氯地平抗As的可能机制。
　　目的:从炎症反应角度,观察氨氯地平对oxLDL诱发的HUVEC-12内皮细胞CD40表达的影响,并对其机制进行探讨,为氨氯地平抗As提供实验依据。
　　方法:
　　1、培养人脐静脉内皮细胞株(HUVEC-12细胞),利用 RT-PCR技术检测CD40mRNA表达,Western-blot技术检测CD40蛋白水平,筛选oxLDL诱导HUVEC-12细胞CD40高表达的最佳剂量和时间;
　　2、以LOX-1抑制剂多聚肌苷酸(PIA)预处理HUVEC-12细胞,检测CD40mRNA和蛋白表达;
　　3、不同浓度氨氯地平预处理HUVEC-12细胞,与 oxLDL共同孵育24h后,利用RT-PCR技术检测HUVEC-12细胞 CD40mRNA的表达,细胞免疫化学染色和Western-blot技术检测CD40蛋白的表达;观察不同浓度氨氯地平对LOX-1基因表达的影响,探讨氨氯地平下调CD40表达的机制。
　　结果:
　　1、CD40在静息状态的HUVEC-12细胞上少量表达,oxLDL对HUVEC-12细胞CD40的表达有明显促进作用,oxLDL在0-50μg/ml的浓度范围内,随oxLDL浓度增加,CD40的表达亦随之上调,当oxLDL浓度为50μg/ml时,CD40表达达峰值,当浓度为100μg/ml时,内皮细胞上CD40表达下降。用50μg/ml的oxLDL与内皮细胞孵育0-24h,随着处理时间的延长,CD40表达逐渐增加,在24h时,CD40的表达为最大值。
　　2、LOX-1抑制剂PIA250μg/ml预处理细胞1h后,明显降低50μg/ml oxLDL孵育24h诱导的内皮细胞CD40表达。
　　3、氨氯地平对oxLDL诱导的HUVEC-12细胞CD40高表达有明显的下调作用,氨氯地平在0.1-10μmol/L的浓度范围内,随氨氯地平浓度增加,CD40的表达逐渐下调,当氨氯地平浓度为1.0μmol/L时,CD40表达明显下调;10μmol/L时,CD40表达下调至最低水平。氨氯地平对oxLDL诱导的HUVEC-12细胞LOX-1基因表达亦有下调作用,随氨氯地平浓度增加,LOX-1mRNA的表达逐渐下调。
　　结论:
　　1、oxLDL可以诱导HUVEC-12细胞CD40表达上调;
　　2、阻断LOX-1受体可以下调oxLDL诱导的HUVEC-12细胞CD40高表达;
　　3、氨氯地平对oxLDL诱导的HUVEC-12细胞CD40高表达有下调作用,并随浓度增大而作用加强。氨氯地平的这种作用可能与下调LOX-1基因表达有关。

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封面

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中文摘要

英文摘要

前言

实 验 材 料

一、主要试剂和来源

二、主要仪器及设备

实 验 方 法

1 HUVEC-12细胞培养及处理

2 实验分组

3 低密度脂蛋白( low density lipoprotein , LDL) 的分离、修饰及鉴定

4 细胞总RNA的提取

5 逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)

6 免疫细胞化学（immunocytochemistry）

7 免疫印迹分析（Western blot）

9 统计处理

实 验 结 果

1 LDL的氧化修饰及鉴定

2 oxLDL对 HUVEC-12细胞表达 CD40 的浓度效应

3 OxLDL 对 HUVEC-12细胞表达 CD40的时间效应

4 阻断LOX-1受体对oxLDL诱导内皮细胞CD40表达的影响

5 氨氯地平对oxLDL诱导的HUVEC-12细胞CD40表达的影响

6 氨氯地平对oxLDL诱导HUVEC-12细胞LOX-1基因表达的影响

讨论

结论

参考文献

主要英文缩略语索引

综述

硕士期间发表论文

参与课题

致谢