低剪切应力对血管内皮细胞自噬的影响及其机制的初步研究

摘要

[目的]观察低剪切应力对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)自噬的影响并探讨其机制。
　　[方法](1) apoE-/-小鼠喂饲高脂饮食，分别于0、4、8和12周处死，取主动脉窦部做冰冻切片，主动脉提蛋白。HE和油红O染色法观察动脉粥样硬化(Atherosclerosis，As)斑块病变；免疫组织化学法和Western blot检测BECLIN1、LC3和P62以及TET2的蛋白表达；免疫荧光法观察5-mC和5-hmC的含量。(2)将HUVECs置于体外灌流系统，分别以低剪切应力(5 dyne/cm2)和正常剪切应力(15 dyne/cm2)处理1h，Western blot检测BECLIN1、LC3和P62以及TET2的蛋白表达。再以巴伐洛霉素孵育2h，观察LC3II/LC3I的比值。(3)低表达和高表达TET2质粒转染HUVECs，Western blot检测BECLIN1、LC3和P62的蛋白表达。再以不同剪切应力处理1h，Western blot检测BECLIN1、LC3、P62和ET-1及eNOS的蛋白表达。
　　[结果]随着高脂饮食时间的延长，As病变程度逐渐加重。As病变进程中BECLIN1、LC3和P62的蛋白含量显著增加；TET2的蛋白表达明显降低；5-mC的含量显著增加，且其增加幅度显著高于5-hmC。与正常剪切应力组相比，低剪切应力组BECLIN1和LC3II/LC3I的蛋白表达降低；自噬障碍标志物P62的蛋白表达增加；TET2的蛋白表达降低。巴伐洛霉素孵育2h后，低剪切应力组LC3II/LC3I无明显变化，而正常剪切应力组 LC3II/LC3I明显增大。不同剪切应力处理后，高表达TET2可以上调BECLIN1、LC3II/LC3I及eNOS的蛋白表达，下调P62及ET-1的蛋白表达；而低表达TET2可以下调BECLIN1、LC3II/LC3I及eNOS的蛋白表达，上调P62及ET-1的蛋白表达。
　　[结论]低剪切应力下调血管内皮细胞TET2的蛋白表达从而抑制血管内皮细胞自噬。

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主要缩略词英文索引

第1章 绪论

1.1 选题背景及意义

1.2 国内外研究现状

1.3 研究目标、内容及拟解决的关键技术问题

第2章 实验材料与研究方法

2.1 实验材料与仪器

2.2 实验方法

第3章 实验结果

3.1 As病变进程中自噬相关基因的蛋白表达

3.2 低剪切应力对血管内皮细胞自噬和自噬流的影响

3.3 As病变进程中TET2的蛋白表达

3.4 As病变进程中5-mC和5-hmC含量的改变

3.5 低剪切应力对血管内皮细胞TET2蛋白表达的影响

3.6 TET2干预对血管内皮细胞自噬的影响

3.7 TET2干预对低剪切应力条件下血管内皮细胞自噬的影响

3.8 TET2干预对低剪切应力条件下血管内皮细胞 ET-1蛋白表达的影响

3.9 TET2干预对低剪切应力条件下血管内皮细胞 eNOS蛋白表达的影响

第4章 讨论

第5章 结论与展望

5.1 结论

5.2 不足与展望

参考文献

文献综述:SHEAR STRESS IN ATHEROSCLEROTIC PLAQUE DETERMINATION

作者攻读硕士学位期间的科研成果

致谢

基金资助