依达拉奉对COPD患者外周血单个核细胞的DNA损伤和NF-κB水平影响的研究

摘要

目的：研究依达拉奉对慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者急性加重期和稳定期的外周血单个核细胞（PBMCs）的DNA损伤和NF-κB水平的影响，为依达拉奉在COPD的临床应用提供实验数据。
　　方法：选择COPD患者和性别年龄相匹配的健康者（空白对照）各25例，对COPD患者进行肺功能检测、动脉血气分析及呼吸困难评分。对COPD患者和健康者的静脉血进行分析，用ELISA法检测COPD患者和健康者血清丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性、肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平和白细胞介素-8（IL-8）水平。运用淋巴细胞分离液分离出COPD患者急性加重期、稳定期和健康者的PBMCs，PBMCs分成6个组，分别为急性加重期组（A组）、依达拉奉+急性加重期组（B组）、稳定期组（C组）、依达拉奉+稳定期组（D组）、空白对照组（E组）、依达拉奉+空白对照组（F组）。B组、D组和F组加入一定体积的依达拉奉，A组、C组和E组加入同体积RPMI-1640培养基。采用台盼蓝法检测PBMCs的存活率，彗星实验检测PBMCsDNA损伤程度，Western Blot法测定PBMCs核因子NF-κB的水平。
　　结果：1.COPD患者稳定期肺功能、PaO2水平、SOD活性较急性加重期升高，PaCO2水平、呼吸困难评分、MDA含量、IL-8水平、TNF-α水平、DNA损伤程度、NF-κB水平较急性加重期降低。2.依达拉奉作用PBMCs一定时间后，台盼蓝结果显示在一定范围内，随着依达拉奉浓度的增加，PBMCs的存活率升高，且呈浓度依赖性。3.40μmol//L的依达拉奉作用急性加重期和稳定期的PBMCs24小时后，彗星实验结果显示急性加重期PBMCs的彗星率，急性加重期和稳定期PBMCs的尾矩显著降低。Western Blot结果显示依达拉奉能显著降低急性加重期PBMCsNF-κB的水平。
　　结论：1.依达拉奉能减少COPD患者急性加重期和稳定期外周血单个核细胞的DNA损伤。2.依达拉奉能降低COPD患者急性加重期外周血单个核细胞NF-κB的水平。

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第1章 文献综述

第2章 实验内容

1.主要实验仪器

2．主要试剂

3．实验方法

4．试剂的配制

5．临床资料收集

6．PBMCs的收集

7．PBMCs的培养

8．依达拉奉的最适作用时间和浓度的选择

9．PBMCs的分组

10．彗星实验

11．Western Blot：

12．血浆上清液中MDA的检测

13．血浆上清液中SOD活性的测定

14．血浆上清液中IL-8与TNF-α水平的测定

15．统计学分析

第3章实验结果

1．COPD患者与健康者临床一般资料比较（n=25， (-)x ±S）。

2．COPD患者呼吸功能相关指标比较（n=25， (-)x ±S）。

3．COPD患者和健康者氧化应激和炎症指标分析比较（n=25，(-)x± S）

4．依达拉奉对PBMCs存活率的影响（n=15， (-)x±S）

5 依达拉奉对PBMCs DNA损伤的影响（n=15， (-)x±S）。

6 依达拉奉对PBMCs NF-κB水平的影响（n=15， (-)x±S）。

第4章 讨 论

1 氧化应激与COPD

2 COPD的氧化应激与炎症

3 炎症与COPD

4 DNA损伤与修复

5 COPD的治疗

6依达拉奉可修复AECOPD患者PBMCs DNA氧化损伤，降低NF-ΚB的水平。

第5章 结论

参考文献

综述:DNA氧化损伤与慢性阻塞性肺疾病关系的研究进展

作者攻读学位期间的研究成果

致谢