粘附分子、IL-8及其受体在哮喘豚鼠的表达变化及其对中性粒细胞粘附迁移能力的影响研究

摘要

目的：研究哮喘豚鼠中P-selectin与其受体L-selectin、IL-8与其受体CXCR1/CXCR2、CD11a与其受体ICAM-1的表达改变是否影响中性粒细胞的粘附迁移。
　　方法：沿用我室前期实验方法构建哮喘豚鼠模型，购买30只8-10周龄健康雄性豚鼠，随机分为3组：对照组、哮喘组、哮喘治疗组(治疗组)。收集各组豚鼠BALF、腹主动脉血进行白细胞分类计数。ELISA检测BALF与血清中IL-8浓度。提取各组豚鼠肺组织，通过免疫组织化学方法检测各组豚鼠肺血管内皮细胞上P-selectin、ICAM-1表达及定位。分离各组豚鼠腹主动脉血中性粒细胞，进行后续血中性粒细胞上相关蛋白检测：通过Western blot方法检测CXCR1、CXCR2、L-selectin蛋白表达水平，采用Realtime-PCR方法检测CXCR1、CXCR2、L-selectin的mRNA水平，利用Transwell小室检测中性粒细胞的迁移能力，粘附实验检测中性粒细胞的粘附能力，流式细胞术检测CD11a的表达。
　　结果：1.各组豚鼠在雾化激发过程中的不同反应：对照组豚鼠显得安然无恙，无任何异常症状。哮喘组及治疗组豚鼠出现典型的哮喘症状，如：咳嗽、抓鼻、点头呼吸、呼吸急促等,且哮喘组症状更明显。2.各组豚鼠BALF及血中中性粒细胞、嗜酸性粒细胞比例结果显示：哮喘组较对照组、治疗组的中性粒细胞、嗜酸性粒细胞比例及数目均明显升高,差异均有统计学意义（P＜0.01）。3.各组豚鼠血中性粒细胞CXCR1、CXCR2、L-selectin的蛋白表达结果显示：哮喘组较对照组、治疗组表达均明显增多，差异均有统计学意义（P＜0.01）。4.各组豚鼠血清及BALF中IL-8表达结果显示：哮喘组较对照组、治疗组表达均明显增多，差异均有统计学意义（P＜0.01）。5.各组豚鼠血中性粒细胞CXCR1、CXCR2、L-selectin的mRNA表达结果显示：哮喘组较对照组、治疗组表达均明显增多，差异均有统计学意义（P＜0.01）。6.各组豚鼠肺组织P-selectin、ICAM-1免疫组化结果显示：哮喘组较对照组、治疗组表达均明显增多，差异均有统计学意义（P＜0.01）。7.各组豚鼠血中性粒细胞的迁移能力结果显示：哮喘组较对照组、治疗组迁移能力均明显增强，差异均有统计学意义（P＜0.01）。8.各组豚鼠血中性粒细胞粘附能力结果显示：哮喘组较对照组、治疗组粘附能力均明显增强，差异均有统计学意义（P＜0.01）。9.各组豚鼠血中性粒细胞上CD11a的表达结果显示：哮喘组较对照组、治疗组表达均明显增多，差异均有统计学意义（P＜0.01）。
　　结论：1.哮喘豚鼠P-selectin与其受体L-selectin、IL-8与其受体CXCR1/CXCR2、CD11a与其受体ICAM-1的表达均明显增多。
　　2.L-selectin、P-selectin、ICAM-1、CD11a、CXCR1、CXCR2、IL-8的表达上调可增强中性粒细胞的粘附迁移能力。3.哮喘豚鼠气道中性粒细胞的增多可能是通过以上粘附分子、趋化因子及其受体表达增多所致。

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第一章 前 言

第二章 材料与方法

2.1 主要试剂及来源

2.2 主要仪器设备

2.3 豚鼠饲养

2.4 哮喘豚鼠模型构建

2.5 样本选取、采集与处理

2.6 血中性粒细胞的提取

2.7 血和BALF中白细胞计数

2.8 Western-blot检测CXCR1、CXCR2、L-selectin蛋白水平表达

2.9 ELISA检测BALF或血清中IL-8浓度

2.10 Q-PCR检测CXCR1、CXCR2、L-selectin的mRNA表达

2.11 免疫组化

2.12 细胞培养

2.13 细胞计数板计中性粒细胞数目

2.14 中性粒细胞的迁移实验

2.15 中性粒细胞的粘附实验

2.16 流式细胞计数检测各组豚鼠血中性粒细胞上CD11a的表达

2.17 统计学处理

第三章 结 果

3.1 哮喘豚鼠模型鉴定

3.2Western blot结果

3.3 ELISA结果

3.4 Q-PCR结果

3.5 免疫组化结果

3.6 迁移实验结果

3.7 粘附实验结果

3.8 流式结果

第四章 讨 论

第五章 结 论

参考文献

附图

综述:ICAM-1与支气管哮喘的研究进展

硕士期间发表的论文

致谢