姜黄素下调Notch1信号通路影响结肠腺癌SW480细胞株增殖的研究

摘要

目的：从Notch1信号通路探讨姜黄素对结肠癌SW480细胞株增殖的影响。
　　方法：1.利用二步法免疫组织化学方法检测人结直肠癌组织病理切片中Notch1信号通路中Notch1 intracellular domain蛋白（NICD1蛋白)表达的情况，判断Notch1 intracellular domain蛋白阳性颗粒表达与人结直肠癌的关系，从而推测 Notch1信号通路与结直肠癌的关系。2.利用流式细胞技术及 MTT方法检测梯度浓度姜黄素溶液（0μmol/L、7.5μmol/L、15μmol/L、30μmol/L、60μmol/L）处理结肠腺癌SW480细胞株24小时和48小时后，结肠腺癌SW480细胞株增殖及凋亡情况。3.利用Western blot方法检测梯度浓度姜黄素溶液（0μmol/L、7.5μmol/L、15μmol/L、30μmol/L、60μmol/L）处理结肠腺癌SW480细胞株24小时和48小时后，Notch1信号通路中Notch1、NICD1、Hes-1蛋白表达情况，观察姜黄素对 Notch1信号通路中Notch1、NICD1、Hes-1蛋白表达影响。4.利用 RT-PCR方法检测梯度浓度姜黄素溶液（0μmol/L、7.5μmol/L、15μmol/L、30μmol/L、60μmol/L）处理结肠腺癌SW480细胞株24小时和48小时后，Notch1信号通路中 Notch1、Hes-1基因 mRNA表达水平，观察姜黄素对Notch1信号通路中Notch1、Hes-1基因mRNA表达的影响。
　　结果：1.免疫组织化学方法结果显示Notch1 intracellular domain蛋白（NICD1蛋白)在人结直肠癌病理组织中均表达，阳性率100％（40/40），而对照组癌旁正常肠粘膜组织中部分表达，阳性率为90.3%（28/31），但NICD1蛋白在人结直肠癌组织中表达强度明显高于癌旁正常肠粘膜组织，差异有统计学意义（P＜0.05）。2.流式细胞技术和MTT法检测凋亡结果均显示，姜黄素能一定程度上抑制结肠癌SW480细胞株增殖并促进其凋亡，有浓度和时间依赖。3.Western blot结果示姜黄素能一定程度上下调人结肠腺癌 SW480细胞株中NICD1、Notch1、Hes-1蛋白的表达，有时间和剂量依赖，差异有统计学意义（P＜0.05）。4.RT-PCR结果示姜黄素一定程度上降低了结肠癌细胞株中 Notch1、Hes-1基因 mRNA的表达水平，有时间和剂量依赖，差异有统计学意义（P＜0.05）。
　　结论：1.Notch1信号通路能在人结直肠癌组织中高表达。2.姜黄素能够通过下调Notch1信号通路抑制结肠腺癌SW480细胞株的增殖并促进细胞凋亡。

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主要英文缩略语索引

第1章 引 言

第2章 材料与方法

2.1 材料与仪器

2.2实验方法

第3章 结 果

3.1 免疫组化检测Notch1信号通路中NICD1蛋白在人结直肠腺癌及癌旁肠组织中的表达

3.2 MTT结果

3.3 流式细胞技术检测凋亡

3.4 逆转录聚合酶链式反应测Notch1、Hes-1基因mRNA表达

3.5 Western blot检测Notch1、NICD1、Hes-1蛋白表达

第4章讨 论

4.1 Notch1信号与结直肠癌的关系

4.2 姜黄素对结直肠癌细胞的影响

4.3 姜黄素对结肠腺癌SW480细胞的Notch1信号通路表达的影响

第5章 结 论

参考文献

综述:姜黄素对大肠癌细胞抑制作用Notch信号通路的研究进展

硕士期间发表的论文及获奖情况

致谢