人胃癌裸鼠腹腔移植模型的建立及Caveolin-1、HIF-1α蛋白和mRNA的表达

摘要

目的：建立荷人胃癌MGC-803细胞裸鼠腹腔异位移植模型，探讨Caveolin-1及HIF-1α蛋白在裸鼠移植胃癌组织及相关内脏组织中的表达，为胃癌的诊断及检测远处转移提供一定的实验依据。
　　方法：一、建模：1）细胞培养：在EPMI-1640细胞培养基培养人胃癌 MGC-803细胞株，制备单细胞悬液，调整细胞浓度为5×107/mL，备用；2）将35只BALB/C(nu/nu)裸鼠（雄性）随机两组：对照组10只（注射生理盐水，0.2mL/只），实验组25只（注射接种MGC-803单细胞悬液，0.2mL/只）；3）观察：观测裸鼠生长情况及成瘤情况，每隔一周用游标卡尺测量腹腔可观测肿瘤的长径和短径以计算肿瘤的体积大小，并绘制其生长曲线。二、检测：1）标本解剖：7周后麻醉处死裸鼠并开腹解剖，取对照组裸鼠胃、肝脏、肺脏，肉眼观察实验组裸鼠腹腔内成瘤情况，取腹腔内瘤体、肝脏、肺脏、可疑结节；2）病理学诊断：标本石蜡包埋，常规切片,行HE染色观察；3）采用免疫组化法和 RT-PCR法分别检测上述组织中Caveolin-1、HIF-1α蛋白和mRNA的表达。
　　结果：一、成功建立了人胃癌MGC-803细胞裸鼠腹腔异位移植模型。二、免疫组化染色显示：1）Caveolin-1蛋白在对照组正常胃组织中的阳性表达率为80％（8/10）高于在实验组腹腔移植胃癌组织中表达率35%（6/23），在对照组正常肝组织中的阳性表达率为60%（6/10）高于在实验组转移肝组织中阳性表达率28%（5/23），在对照组正常肺组织中的阳性表达率为70%（7/10）高于在实验组转移肺组织中阳性表达率20%（3/15），差异均存在显著性，有统计学意义（P<0．05）；2）HIF-1α蛋白在对照组正常胃组织中的阳性表达率为10%（1/10）低于在实验组腹腔移植胃癌组织中表达率78%（18/23），在对照组正常肝组织中的阳性表达率为30%（3/10）低于在实验组转移肝组织中阳性表达率65%（15/23），在对照组正常肺组织中的阳性表达率为20%（2/10）低于在实验组转移肺组织中阳性表达率67%（9/15），差异均存在显著性，有统计学意义（P<0．05）；3）腹腔移植胃癌组织中HIF-1α蛋白阳性表达率与Caveolin-1蛋白的阳性表达率存在负相关性(r=-0．392，P<0．05)。三、RT-PCR检测显示：1） Caveolin-1 mRNA在对照组正常胃组织中的表达高于实验组腹腔移植胃癌组织中表达，在对照组正常肝与肺组织中的表达高于实验组转移肝与转移肺组织中表达；2）HIF-1αmRNA在对照组正常胃组织中的表达低于实验组腹腔移植胃癌组织中表达，在对照组正常肝与肺组织中的表达低于实验组转移肝与转移肺组织中表达。
　　结论：
　　1.采用注射5×107/mL浓度人胃癌细胞株MGC-803建造裸鼠腹腔异位移植模型具有高成瘤率及高转移率的特点，可为胃癌的腹腔种植转移治疗等研究提供一个理想的动物模型。
　　2.Caveolin-1和HIF-1α基因可能成为验证胃癌发生的生物标记物和评估胃癌患者肝肺侵袭转移的风险标志。

目录

封面

中文摘要

英文摘要

主要英文缩略语索引

目录

第一章 前言

第二章 实验材料

1. 主要材料:

2.主要仪器:

第三章 实验方法

3.1 建立胃癌MGC-803细胞裸鼠腹腔异位模型

3.2 HE染色及病理诊断

3.3 免疫组化霉菌抗生素蛋白-过氧化酶连结（SP）法检测

3.4RT-PCR法检测Caveolin-1/HIF-1α mRNA的表达

3.8 统计学方法

第四章 实验结果

4.1 荷人胃癌MGC-803细胞裸鼠腹腔异位移植模型的建立

4.2免疫组化结果

4.3人胃癌MGC-803细胞裸鼠腹腔移植瘤瘤体RT-PCR检测结果

第五章 讨论

第六章 结论

参考文献

综述:荷人胃癌细胞裸鼠模型

致谢

攻读学位期间发表的论文