郴州地区489例5岁以下住院儿童严重急性呼吸道感染病毒病原学分析

摘要

目的：
　　通过对郴州地区2013～2014年5岁以下住院儿童严重急性呼吸道感染病毒病原学的病例对照研究，了解该地区的病毒流行病学特征，并为临床诊治和疾病预防控制提供参考。
　　方法：
　　1.采集2013年7月至2014年6月在郴州市第一人民医院北院（儿童医院）因严重急性呼吸道感染住院的鼻咽拭子标本作为病例组，选取同时在该医院外科住院或门诊无感染症状患儿的鼻咽拭子标本作为对照组，每月采样标本量按2:1进行匹对。
　　2.对标本采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)方法对18种呼吸道病毒和10种细菌以及肺炎支原体、肺炎衣原体、白色念珠菌进行检测，并对检测的ADV阳性标本进行巢式扩增分型，HMPV所有阳性标本采用普通PCR方法扩增分型。
　　3.对RSV、HMPV、IFV-A、IFV-B、IFV-C、ADV、HBoV、PIV1-411种呼吸道病毒感染的流行病学特征和临床诊断进行分析。
　　结果：
　　1.本次研究中符合标准的病例组标本489份，对照组标本244份。在489份病例组中，有359份（73.41％）至少检测到一种病毒性病原，检出率最高的为RSV27.61%，其余依次为ADV9.81%、HRV9.40%、IFV-A8.38%、PIV27.15%、HMPV5.31%、PIV34.90%、PIV14.70%、IFV-B4.08%、HBoV3.88%、OC433.06%、IFV-C2.24%、HKU11.43%、EV1.02%、NL631.0%、229E0.81%、PIV40.81%， HPeV未检出。244份对照中有65份（26.64%）至少检测到一种病毒，检出最高的为 HRV,病例组病毒检出率比对照组检出率高(P=0.000)。PIV2、IFV-B、HKU1、PIV4、HPeV在对照组中未检出，除 HRV、OC43、NL63检出率比病例组稍高外，其他病毒均比病例组低，11种病毒中，除了HBoV、IFV-C、PIV4病例组与对照组检出率差异无统计学意义外，其他病毒病例组与对照组的检出率差异均有统计学意义。
　　2.年龄分布上，病例组阳性患儿12-35月年龄组检出率比1-5月和36月-5岁年龄组要高(P=0.000)。11种病毒中，HBoV和流感病毒在3-5岁年龄组检出率最高，RSV主要在1-3岁患儿中检出，ADV在1-3岁患者中检出最少，其余年龄组检出率无明显差别，HMPV和副流感病毒各年龄段检出率差异无统计学意义(均P>0.05)。
　　3.季节分布上，病例组各季节检出率比对照组明显高(P=0.000)。病例组病毒总体检出率具有明显的季节分布，主要在冬季和春季检出。病例组11种病毒中IFV-B、IFV-C和PIV4无明显的季节分布特征，RSV主要在冬末初春检出，HMPV春季检出率最高，ADV主要在夏秋季，HBoV夏季检出为主，IFV-A检出高峰在冬季，PIV1-2主要以秋季为主，PIV3夏春季检出较高。对照组各季节检出率无差异(P=0.086)。
　　4.病例组44.38%为混合病毒感染。11种病毒病毒中，PIV4和IFV-C主要以混合感染为主，IFV-B以单一病毒感染为主。单一病毒感染和双重病毒感染主要以RSV为主，三重病毒感染主要以PIV2为主。RSV感染的平均病毒载量最高，其次为 HMPV、HBoV和流感病毒，ADV感染最低。除了RSV的病例组平均病毒载量比对照组明显高外(P=0.000)，其余病毒病例组与对照组病毒载量差异均无统计学意义(均P>0.05)。PIV2单一感染的平均病毒载量比多重病毒感染高，IFV-C多重病毒感染的平均病毒载量比单一感染的病毒载量高， RSV、ADV、HBoV、HMPV、IFV-A、IFV-B、PIV1、PIV3单一感染的与多重病毒感染的平均病毒差异无统计学意义。
　　5.下呼吸道感染病毒的检出率比上呼吸道的高，下呼吸道感染中各疾病检出率差异无统计学差异。上呼吸道感染中只检测到 RSV、PIV2和PIV3，下呼吸道感染中各病毒均以支气管肺炎多见，支气管炎中PIV2检测到最高，毛细支气管炎、支气管肺炎和重症肺炎中检出最高率最高的为 RSV。支气管肺炎组中 IFV-A的病毒载量比支气管炎组的高，其余各病毒上下呼吸道感染之间、下呼吸道感染各诊断组间病毒载量均无统计学差异。
　　6. RT-PCR法检测到RSV的病毒载量低于104.17copies/ml时， RSV单独感染与临床症状间关系的诊断特异性降低，当病毒载量低于102.02copies/ml时，其病毒载量可能与临床症状无关。
　　7.ADV分型中以B组3型为主，HMPV以A2b型为主。
　　结论：
　　1.RSV、ADV、IFV-A、IFV-B、HMPV、PIV1-3是郴州地区儿童严重急性呼吸道感染的重要病原，以冬春季主要流行，12月至35月儿童易感，RSV是引起郴州地区5岁以下儿童支气管肺炎和毛细支气管最主要的病因。
　　2.HBoV、IFV-C、PIV4的检出率及病毒载量在病例组与对照组中的差异无统计学意义，因此不能确定是否是引起郴州地区5岁以下儿童严重呼吸道感染住院的病因。

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第1章 引言

第2章 实验材料与方法

2.1 研究对象

2.2 主要实验材料与仪器

2.2.1 材料和仪器

2.2.2 实验试剂

2.3 实验方法

2.3.1 病毒阳性标准品

2.3.2 标本处理

2.3.3 核酸（RNA、DNA）提取

2.3.4 病毒核酸检测

2.3.5ADV阳性标本扩增分型：

2.3.6 HMPV标本一步法PCR扩增

2.3.7 产物鉴定及序列分析

2.4 统计学方法

第3章 结果

3.1 一般资料

3.2 病原总检出情况

3.3 病毒筛查结果

3.3.1 病毒总检出情况

3.3.2 病毒检出的年龄分布

3.3.3 病毒检出的季节性分布

3.3.4 11种病毒混合感染及病毒载量特点

3.3.5 11种病毒感染临床诊断

3.3.6 11种病毒感染与临床疾病的关系

3.3.7 RSV病毒载量与临床诊断的灵敏性和特异ROC曲线分析

3.3.8 ADV和HBoV分型及基因进化分析

第4章讨论

第5章结 论

参考文献

综述:人新型冠状病毒的研究进展

中英文对照表

作者攻读学位期间科研成果

致谢