YB-1调控EMT相关蛋白对胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力影响的研究

摘要

目的：观察Y-盒结合蛋白-1（Y-box binding protein-1，YB-1）对胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响，并初步探讨YB-1在胰腺癌细胞侵袭转移中与EMT相关蛋白（E-cadherin、Vimentin）可能的作用机制。
　　方法：选取胰腺癌细胞株PANC-1细胞为研究对象：通过基因重组技术构建YB-1腺病毒载体（pADeasy-1hYB-1）和腺病毒空载体（pADe asy-HK），再通过脂质体介导的方式将YB-1腺病毒载体和腺病毒空载体转染PANC-1细胞，并且将实验分为：空白组（PANC-1）、阴性对照组（PANC-1+Ad-HK）、过表达组（PANC-1+Ad-YB-1）。通过MTT法、细胞划痕实验、Transwell法分别检测 YB-1过表达对胰腺癌细胞株PANC-1增殖、迁移、侵袭能力的影响。并通过Western blot和RT-PCR检测胰腺癌细胞株PANC-1中YB-1、E-cadherin（E钙粘蛋白）、Vimentin（波形蛋白）的蛋白表达和mRNA表达水平，E-cadh erin和Vimentin是EMT两个主要的标志物，通过检测两个分子的在胰腺癌细胞中的表达水平，来说明YB-1与EMT之间的关联。
　　结果：①MMT法通过绘制细胞生长曲线检测细胞的增殖能力，结果表明，过表达组细胞的增殖能力明显高于空白组和阴性对照组（P<0.001），说明YB-1过表达的胰腺癌细胞株PANC-1增殖能力明显增强。②细胞划痕实验检测YB-1过表达的胰腺癌细胞株PANC-1迁移能力的影响，结果表明，过表达组细胞的迁移速度明显高于空白组和阴性对照组(P<0.01)，说明转染YB-1腺病毒载体的胰腺癌细胞株PANC-1迁移能力明显增强。③Transwell检测YB-1过表达的胰腺癌细胞株PA NC-1侵袭能力的影响，结果显示，过表达组细胞侵袭能力明显高于空白组和阴性对照组(P<0.01)，说明YB-1过表达组胰腺癌细胞株PA NC-1侵袭能力增强。④分别通过Western blot和RT-PCR检测胰腺癌细胞株PANC-1中YB-1、Vimentin、E-cadherin的蛋白和mRNA表达水平，结果显示，过表达组中YB-1、Vimentin的表达水平较空白组和阴性对照组明显升高，但过表达组中E-cadherin表达水平较空白组和阴性对照组明显降低（P<0.01），说明转染YB-1腺病毒载体的胰腺癌细胞株PANC-1中，YB-1和Vimentin表达水平明显上升，而E-cadherin表达水平明显下降。
　　结论：1.胰腺癌细胞中YB-1过表达能使细胞的增殖、迁移和侵袭能力增强。
　　2.YB-1有可能通过调控EMT相关蛋白使E-cadherin表达下调，而Vimentin表达上调促进胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力。

目录

声明

英汉缩略语名词索引

引言

第一部分：YB-1过表达对胰腺癌细胞株PANC-1增殖、迁移、侵袭能力的影响

引言

材料与方法

1.材料

2.方法

3统计学方法

结果

4.1转染后的效率检测

4.2 各组细胞的增殖能力

4.3 各组细胞的迁移能力

4.4 各组细胞的侵袭力

讨论

第二部分 YB-1 与 EMT 相关蛋白在胰腺癌细胞中的表达及意义

引言

材料与方法

1.材料

2.方 法

3.统计学方法：

结果

4.1 RNA 纯度及浓度检测结果

4.2 RT-PCR检测各组细胞中YB-1、E-cadherin、Vimentin mRNA的表达。

4.3 Western blot检测各组细胞中YB-1、E-cadherin、Vimentin 蛋白的表达

讨论

全文小结

参考文献

综述:EMT与肿瘤侵袭、转移的研究进展

公开发表学术论文情况

致谢