海藻糖对脂肪细胞冻存后活性影响的实验研究

摘要

背景：
　　自体脂肪移植出现已经有一百余年历史，多年来因其具有大量优点及可塑性而被广泛应用，得到众多学者研究。而一直以来，研究的重点与难点都在于维持移植后脂肪的存活率。目前已有众多研究报道，从脂肪供区、抽取的方法、抽吸工具、提纯方法、添加多种细胞因子等各个方面进行了提升，虽然取得了一定的效果，但仍避免不了脂肪的吸收。综合比较后，我们认为多次移植是一种最佳解决方案。而每次都用新鲜脂肪作为供体伴随而来的是多次抽脂手术，病人的痛苦增加及手术并发症发生的风险也随之增加。第一次抽脂时抽取足量的脂肪，后续移植时采用冷冻脂肪移植是一项有效解决方案，因此脂肪冻存后活力的保护变成了研究的重点。近年来关于脂肪冻存保护剂已有众多研究，二甲基亚砜（DMSO）、谷胱甘肽过氧化物酶、胎牛血清、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、麦芽糖，和甲基纤维素（MC）等均被认为能提高冻存后脂肪细胞的存活率，但这些物质与脂肪细胞混合后难以清除，部分甚至具有细胞毒性。寻找到一种适用于临床的冻存保护剂是我们真正能将一次吸脂多次移植推广运用的办法。
　　目的：
　　通过观察冻存后脂肪的大体观、HE染色、油红 O染色、检测葡萄糖转移量、检测肌酸激酶值等方法，探讨海藻糖作为冻存保护剂对脂肪组织冻存后细胞活性的影响。
　　方法：
　　抽吸成年女性腹部或大腿脂肪颗粒，设计好取脂范围，区域肿胀麻醉后，20ml注射器抽吸皮下脂肪，抽取的脂肪在800rpm离心2分钟纯化后，丢弃上层油脂及下层混合液，取中层颗粒脂肪分为3组：A组（海藻糖组）、B组（胎牛血清+10%DMSO组）、C组（生理盐水组）。于液氮中冻存12周后，快速水浴复温，通过冻存后脂肪的大体观、HE染色、油红O染色、检测葡萄糖转移量、检测肌酸激酶值等方法观察脂肪细胞存活情况。
　　结果:
　　冻存后脂肪组织在大体观下见A、B组两组脂肪构型较好，颜色为黄色，而C组脂肪组织结构松散，颜色偏淡。 HE染色下可见A组和B组脂肪组织结构较清晰，排列整齐，胞核可见；C组结构紊乱，可见坏死区域。检测A、B、C三组葡萄糖转移量结果分别为0.61±0.12mmol/L、0.64±0.062mmol/L、0.47±0.09mmol/L。肌酸激酶活性测定（%）分别为80.71±9.0、82.01±6.88、67.93±8.02。A、B两组的葡萄糖转移量及肌酸激酶活性值均高于生理盐水组，有统计学意义（P<0.05）；海藻糖组与胎牛血清+10%DMSO组结果无明显差异，无统计学意义（P>0.05）。
　　结论：
　　脂肪组织在-196℃下以0.35mol/L的海藻糖溶液作为冻存保护剂保存12周后仍然具有较好的活力，表明海藻糖对临床实际运用冻存保护剂有指导意义。

目录

声明

第1章 前言

第2章 材料与方法

2.1 材料

2.1.1 人自体脂肪组织颗粒

2.1.2 试剂和材料

2.1.3 主要仪器

2.2 实验方法

2.2.1 脂肪颗粒的获取、纯化：

2.2.2 分组：

2.2.3 脂肪组织的冻存：

2.2.4 脂肪颗粒复温：

2.2.5 脂肪标本大体观：

2.2.6 HE染色

2.2.7 油红O染色

2.2.8 葡萄糖转移法对脂肪颗粒组织活力测定：

2.2.9 肌酸激酶法测定脂肪组织活力：

2.3 统计分析

第3章 结 果

3.1脂肪组织大体标本：

3.2 HE染色组织学观察：

3.3 油红O染色：

3.4 葡萄糖转移量检测结果：

3.5肌酸激酶法测定结果：

第4章 讨 论

第5章 结 论

参考文献

文献综述:海藻糖生物保护作用的研究进展

致谢