GKN2高表达阻断JAK2/STAT3通路抑制SGC7901细胞迁移和侵袭

摘要

目的： 探究胃动蛋白2(Gastrokine2,GKN2)对人胃癌细胞SGC7901迁移和侵袭的影响，并探讨GKN2对人胃癌SGC7901细胞JAK2/STAT3通路的调控作用，为阐明抗胃癌机理提供基础理论依据。 方法： 1、将构建好的GKN2真核载体质粒瞬时转染人胃癌SGC7901细胞，在荧光倒置显微镜下观察其转染效率，Western Blot验证GKN2转染是否成功。 2、运用MTT实验、细胞划痕试验、Transwell迁移和Transwell侵袭实验分析GKN2转染对人胃癌细胞SGC7901迁移和侵袭的影响。 3、采用Western blot方法观察GKN2转染后JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达变化。 4、采用ELISA检测血清GKN2浓度，分析胃癌患者与正常血清GKN2浓度差异。 结果： 1、转染实验结果显示，未转染组无荧光表达，空载体组及GKN2转染组转染效率分别约为91%及90%。Western Blot实验结果显示，与未转染组(0.2290±0.0007)和空载体组（0.2210±0.0008）相比，GKN2转染组（1.6678±0.0008）GKN2蛋白的相对表达量明显增加（P＜0.05），提示GKN2转染成功。 2、MTT实验结果显示：与未转染组和空载体组相比，GKN2转染组24h、48h和72h后均能抑制SGC7901细胞增殖，且其抑制作用呈现时间依赖关系(P＜0.05)。 3、划痕实验结果显示：与未转染组（71.46±15.50）和空载体组(70.63±9.05)相比，GKN2转染组（20.03±6.35）细胞迁移相对距离明显减少（P＜0.05）。 4、Transwell迁移实验发现，GKN2转染组迁移细胞数（37±3）明显低于未转染组（75±7）和空载体组（94±6）（P＜0.05）；Transwell侵袭实验同样显示，GKN2转染组穿过基质胶侵袭至下室的细胞数（10±2）明显低于未转染组（55±3）和空载体组（58±5）（P＜0.05）。 5、Western Blot显示：GKN2转染组的JAK2蛋白相对表达量(0.36030±0.0005)较未转染组(0.6462±0.006)及空载体组(0.6661±0.0005)明显减少(P＜0.05)。p-JAK2蛋白相对表达量在GKN2转染组(0.1271±0.0058)较未转染组(0.2014±0.0051)及空载体组(0.2458±0.0053)明显下调(P＜0.05)。GKN2转染后(0.3894±0.0005)使STAT3蛋白相对表达量明显低于未转染组(0.9115±0.0009)及空载体组(0.9611±0.0008)(P＜0.05)。同样地，与未转染组(0.6575±0.0008)及空载体组(0.6984±0.0006)相比，GKN2转染后(0.4934±0.0006)抑制了p-STAT3蛋白表达水平(P＜0.05)。 6、ELISA结果显示：胃癌组和正常对照组血清GKN2浓度无差异（P=0.241）。 结论： 1、GKN2高表达可抑制人胃癌细胞SGC7901迁移和侵袭，且与阻断JAK2/STAT3通路有关。 2、GKN2不是胃癌的潜在生物标志物。

目录

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第1章 绪 论

1.1 前言

1.2 技术路线

1.2.1 GKN2生物学行为及机制研究

1.2.2 ELISA检测血清GKN2浓度

第2章 实验材料与方法

2.1.1 细胞株

2.1.2 主要试剂、配制及耗材

2.1.3 主要仪器

2.2.1 人胃癌SGC7901细胞系培养过程

2.2.2 人胃癌SGC7901细胞瞬时转染

2.2.3 Western Blot检测

2.2.5 划痕实验

2.2.6 MTT实验

2.2.7 Transwell迁移实验

2.2.8 Transwell侵袭实验

2.2.9 ELISA

2.2.10 统计分析方法

第3章 实验结果

3.1 腺病毒瞬时转染人胃癌SGC7901细胞实验结果

3.2Western Blot验证GKN2转染成功

3.3 MTT实验验证GKN2对人胃癌SGC7901增殖的影响

3.4 划痕试验结果

3.5 Transwell迁移实验结果

3.6 Transwell侵袭实验结果

3.7Western Blot验证GKN2转染后p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3表达调节情况

3.8 ELISA检测血清中GKN2蛋白表达水平

第4章 讨论

第5章 结论

参考文献

文献综述

基金项目

作者攻读学位期间的科研成果

致谢