外源性H2S通过激活KATP通道抑制心肌细胞凋亡

摘要

目的： H2S作为一种新型气体信号转导分子正逐渐被人们所熟知，其效应发挥与各离子通道开放与关闭密切相关，而其中关系最密切的是KATP。本实验通过缺氧条件培养H9C2大鼠心肌细胞，观察H2S对细胞凋亡的影响及KATP在其中的作用，同时，拟以KATP阻断剂或激活剂为处理因素，探讨KATP在H2S抑制心肌凋亡中的效应，为临床治疗心衰寻找新的干预靶点提供实验依据和理论基础。 方法： 实验对象为H9C2大鼠心肌细胞，37℃、94%N2、1%O2、5%CO2的缺氧条件下培养，并将细胞随机分为六组：1、空白对照组：在缺氧条件下培养24小时。2、NaHS组：400μmol/lNaHS处理心肌细胞后，在缺氧条件下培养24小时。3、格列苯脲组：1mmol/l格列苯脲处理心肌细胞后，在缺氧条件下培养24小时。4、吡那地尔组：50mmol/l吡那地尔处理心肌细胞后，在缺氧条件下培养24小时。5、NaHS+格列苯脲组：400μmol/lNaHS+1mmol/l格列苯脲共同处理心肌细胞后，在缺氧条件下培养24小时。6、NaHS+吡那地尔组：400μmol/lNaHS+1mmol/l吡那地尔共同处理心肌细胞后，在缺氧条件下培养24小时。以上步骤重复三遍。采用Western蛋白印迹检测Caspase-3、Caspase-9的表达，免疫组化检测Bcl-2、Bax的表达，并用MTT法检测细胞相对生存率。对比各组之间数据的差异。 结果： 1、与空白对照组相比，NaHS预处理降低Caspase-3及Caspase-9的表达，Bax/Bcl-2比值下降，细胞相对存活率升高。 2、与空白对照组相比较，格列苯脲本身对心肌细胞Caspase-3、Caspase-9、Bax、Bcl-2表达、细胞相对存活率无明显差异。 3、与NaHS组相比，预先给予NaHS和格列苯脲预处理，增加Caspase-3及Caspase-9的表达，Bax/Bcl-2比值上升，细胞相对存活率下降。 4、与NaHS组相比，预先给予NaHS和吡那地尔预处理，降低Caspase-3及Caspase-9的表达，Bax/Bcl-2比值上升，细胞相对存活率升高。 5、与正常对照组相比，单独吡那地尔预处理降低Caspase-3及Caspase-9的表达，Bax/Bcl-2比值上升，细胞相对存活率升高。 结论： 外源性H2S通过激活KATP通道抑制心肌细胞凋亡。

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主要英文缩略语索引

第一章 绪 论

第二章 实验对象、实验材料与实验方法

2.1 实验对象

2.2实验材料

2.2.1 主要试剂及药品

2.2.2 主要仪器与设备

2.3 实验方法

2.3.1 H9C2大鼠心肌细胞培养

2.3.2 实验分组

2.3.3 实验各组处理

2.3.4 免疫组化

2.3.5蛋白免疫印迹（Western blot，WB）分析

2.3.6 统计学分析

第三章 结果

3.1 NaHS对缺氧致大鼠心肌细胞凋亡的影响。

3.3 KATP激活剂对缺氧大鼠心肌细胞凋亡的影响。

第四章 讨 论

第五章 结 论

参考文献

文献综述:ATP敏感性钾通道的靶向治疗研究进展

致谢