外源性硫化氢对肺纤维化大鼠肺组织notch1、jagged1表达的影响

摘要

目的：观察外源性硫化氢（Hydrogen sulfide，H2S）对博来霉素（bleomycin，BLM）致肺纤维化大鼠肺组织病理形态，以及对肺组织notch1、jagged1蛋白和mRNA水平表达的影响，探讨notch信号通路在肺纤维化过程中的作用，并进一步探讨外源性H2S抗肺纤维化作用可能的机制。 方法：选取雌性SD大鼠120只，采用随机数字表法分为对照组（A组），BLM组（B组），BLM+泼尼松组（C组），BLM+硫氢化钠组（D组），每组30只。其中B、C、D组采用气管内注入BLM（5mg/kg）构建大鼠肺纤维化模型，A组注入同等体积的生理盐水。造模当天为第0天，从造模后第1天起，C组每天上午以0.56mg/kg/d的醋酸泼尼松混悬液灌胃，D组每天以28μmol/kg/d的NaHS溶液腹腔注射，A组、B组则以腹腔注射的方式给予与D组同体积的生理盐水溶液。第7、14、28天分三批取材，每批各组随机抽取10只大鼠，取左肺组织用10%中性福尔马林液浸泡固定用于病理标本制作（HE、Masson染色），右肺组织用RT-PCR法检测notch1、jagged1mRNA的表达。 结果：1、HE、Masson染色结果显示，对照组大鼠肺组织无明显病理改变，而BLM组大鼠肺组织肺泡炎程度及纤维化程度明显加重，BLM+醋酸泼尼松组和BLM+硫氢化钠组大鼠肺组织肺泡炎和纤维化程度均较模型组组轻，但仍然比对照组严重。 2、免疫组化结果显示，对照组大鼠肺组织中notch1、jagged1蛋白在第7、14、28天仅在肺泡上皮细胞中少量表达，BLM组大鼠肺组织中notch1蛋白在相应时间节点表达高于空白对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）；BLM+泼尼松组和BLM+硫氢化钠组notch1蛋白的表达在各时间节点的表达低于BLM组，但高于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。 3、RT-PCR结果显示，BLM组大鼠肺组织notch1mRNA表达水平分别在第7、14、28天较对照组明显上调，差异具有统计学意义（P＜0.05）；BLM+泼尼松组和BLM+硫氢化钠组notch1mRNA表达水平在各时间节点的表达低于BLM组，但高于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。 结论：外源性硫化氢可以改善博来霉素诱导的肺纤维化模型大鼠的肺纤维化程度，这可能与其抑制notch通路中notch1、jagged1表达相关。

目录

声明

主要英文缩略词

第1章 前言

第2章 实验材料

2.1实验动物

2.2试验药物

2.3主要试剂

2.4主要实验仪器

第3章 实验方法

3.1实验药物、试剂的配置

3.2动物分组及相应处理方式

3.3大鼠肺纤维化模型建立

3.4标本取材

3.5大鼠肺组织病理形态观察

3.5.1石蜡切片标本制作

3.5.2 HE染色

3.5.3 Masson三色染色

3.6大鼠肺泡炎和肺纤维化病理形态半定量分析

3.7免疫组化步骤（SABC法）

3.8 RT-PCR反应

3.8.1Trizol法提取总RNA

3.8.2逆转录合成cDNA第一链

3.8.3 PCR的扩增

3.8.4电泳及分析

3.9统计学分析

第4章 实验结果

4.1大鼠一般情况的观察

4.2大鼠肺组织形态学改变

4.2.1大体肉眼形态学观察

4.2.2 HE染色光学显微镜结果

4.2.3 Masson染色光学显微镜结果

4.3大鼠肺泡炎和肺纤维化病理形态半定量分析结果

4.4 SABC法检测蛋白和RT-PCR法检测mRNA表达的结果

4.4.1外源性硫化氢对大鼠肺组织notch1表达水平的影响

4.4.2外源性硫化氢对大鼠肺组织Jagged1表达水平的影响

第5章 讨论

5.1对BLM诱导大鼠肺纤维化模型的评价

5.2 Notch1、jagged1在肺纤维化中的作用

5.3 硫化氢对肺纤维化的作用机制

5.4 硫化氢治疗肺纤维化的意义和展望

第6章 结论

参考文献

文献综述:Notch信号通路与肺纤维化的研究进展

致谢