猪瘟超前免疫的细胞免疫检测

摘要

猪瘟(Classical Swine Fever，CSF)是由猪瘟病毒引起猪的一种高度接触性传染病，于1833年首先发现于美国的俄亥俄州。该病呈世界性流行，以流行范围广、发病率和死亡率高为主要特征，给世界养猪业造成了巨大的经济损失。我国是猪瘟流行较严重的国家，每年因猪瘟死亡的猪约占病死猪的39.65％，经济损失达100亿元左右。1956年我国成功的研制出猪瘟兔化弱毒株疫苗，此疫苗被认为是最安全的疫苗而被全世界广泛的采用，许多国家应用此疫苗消灭了猪瘟。虽然我国在猪瘟的防控上一直采用注射猪瘟兔化弱毒苗，也取得了很大的成绩，但猪瘟仍在我国不间断地流行。在大面积注射疫苗的情况下却没有彻底控制住猪瘟疫情，这就对猪瘟疫苗的免疫效果提出了质疑。 众多国内外学者对猪瘟疫苗的体液免疫效果做了大量的研究，均认为我国的猪瘟兔化弱毒苗能够刺激机体产生中和抗体，对猪瘟病毒攻击完全保护。而对于注射疫苗后机体的细胞免疫效果，尤其是超前免疫的细胞免疫方面的研究报道则较少，国外的研究多以强毒感染来阐明细胞免疫机制，国内的相关报道也是利用豚鼠或小鼠等实验动物作模拟试验进行的，与采用猪来进行研究存在着许多的不同之处。猪瘟疫苗注射后引起机体的细胞免疫反应情况以及超前免疫与普通免疫方法相比较，在诱导细胞免疫方面是否存在着差异更是无从所知。 本试验采用常规白细胞计数和分类计数、淋巴细胞转化试验结合流式细胞技术对超前免疫的仔猪进行跟踪检测，观察其白细胞和淋巴细胞数目变化情况、淋巴细胞转化功能、CD4<'+>和CD8<'+>淋巴细胞亚群及IFN-γ的动态变化状况，并与普通免疫组及对照组进行比较，分别从细胞和分子水平对猪瘟疫苗免疫后的免疫效果进行客观的评价。 研究发现，仔猪0日龄超前免疫及60日龄再次免疫后其白细胞总数和淋巴细胞比例均显著地增加，CD4<'+>和CD8<'+>淋巴细胞亚群也显著增加，淋巴细胞在免疫后对PHA-P的刺激有一定程度的增殖，IFN-γ产生水平显著增加，尤其是在60日龄再次免疫之后增加更为明显。各项指标与对照组相比均差异显著(P<0.05)，而与普通免疫组相比在总体免疫水平上差异不显著(P>0.05)。试验结果表明超前免疫能够及早地激发仔猪对猪瘟的细胞免疫应答，建立起对猪瘟的防御屏障。

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第一部分文献综述

1猪瘟的概述

1.1猪瘟的简介

1.2猪瘟的危害

1.3猪瘟的流行情况

1.4猪瘟的防制

2猪瘟的免疫及超前免疫的研究进展

2.1猪瘟与体液免疫

2.2猪瘟与细胞免疫

2.3猪瘟超前免疫研究进展

3研究的目的及意义

第二部分正文

1材料与方法

1.1材料

1.2方法

2结果与分析

2.1猪外周血白细胞计数结果

2.2 PBMC中淋巴细胞比例结果

2.3外周血淋巴细胞增殖活性检测结果

2.4流式细胞仪检测T淋巴细胞、CD4+、CD8+亚群及IFN-γ结果

3讨论

3.1关于试验中血液样本的处理

3.2关于淋巴细胞增殖试验

3.3关于猪瘟免疫后IFN-γ水平

3.4关于仔猪淋巴细胞变化

3.5关于猪瘟免疫的淋巴细胞亚群的变化

3.6关于超前免疫的细胞免疫水平

4结论

参考文献

致谢