中药复方861对肝星状细胞影响的蛋白质组学研究

摘要

肝纤维化是各种不同致病因子引起慢性肝病的共同病理基础,它是细胞外基质增生和降解的失衡所致.中药复方861是由丹参,黄芪等十味中药组成,已经有实验和临床研究资料表明它是治疗肝纤维化、早期肝硬化的有效复方,它能明显改善慢性肝炎患者临症状,恢复肝功能,使纤维化血清指标明显好转.近年来已有实验证明了复方861可减少各型胶原在肝组织中的沉积,并能提高肝组织和血清中胶原酶活性并抑制金属蛋白酶组织抑制物(TIMP)的mRNA的表达.该文运用蛋白质组学的方法,以肝星状细胞为模式细胞,从蛋白质水平进一步研究中药复方861抗肝纤维化的作用机理.我们在丰度为80%左右的肝星状细胞培养液中加入终浓度为1mg/ml的复方861作用48小时,并设对照组.收获肝星状细胞,提取蛋白质,用固相pH梯度双向凝胶电泳方法进行蛋白质点的分离,获得分辨率和重复性均较好的双向电泳银染图谱.结果显示这些蛋白质点等电点和分子量分布范围广,但大部分集中于等电点4-8,分子量10~20KDa和30~70KDa的区域.运用PDquest软件对扫描后的861给药组和对照组双向电泳图象进行处理,经斑点检测,匹配和量化,检测到800-900多个蛋白质点,找到了部分表达量差异的蛋白质.选取了部分分辨较好的差异蛋白质点和非差异蛋白质进行原位胰蛋白酶酶解,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定其胶内酶解后的肽质指纹图谱,经数据库查询,初步鉴定了39个显著性表达差异的蛋白质点和29个无表达差异的蛋白质点.通过对这些鉴定的差异蛋白质的功能分析,发现一些与信号传导,调节蛋白,胶原蛋白,肝纤维化等相关的蛋白质.这些差异说明了中药复方861能抑制HSC的增殖,促进HSC的凋亡,同时通过抑制细胞内与胶原合成相关的信号传递以及直接抑制细胞胶原质的合成两种途径来降低细胞外基质,从而起到抗纤维化的作用.

目录

文摘

英文文摘

缩写表（中英文对照）

第一章蛋白质组研究进展综述

1蛋白质组学简介

2蛋白质制备常用技术

3主要蛋白质分离技术

4蛋白质鉴定技术

5蛋白质组研究的新技术

6蛋白质组研究的现状和前景

7药物蛋白质组技术在药物开发和研究中的应用

8本文的研究背景和思路

第二章中药复方861对肝星状细胞影响的蛋白质组学研究

第一节蛋白质的提取和分离

1材料与仪器

2实验方法

3结果与分析

第二节蛋白质点的初步鉴定

1材料

2实验方法

3结果与讨论

4结论

第三章进一步研究设想

参考文献

致谢

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