鹅胚母源抗体吸收规律的研究

摘要

卵黄抗体即卵黄免疫球蛋白就是卵黄中的γ－卵黄球蛋白，由于其蛋白质的物理化学性质、免疫学性质等方面与哺乳动物IgG存在一定差异，所以在免疫学领域把由禽卵黄中获得的抗体称为卵黄免疫球蛋白(Immunoglobulin of Yolk，简称IgY)。卵黄抗体在组成上以IgG为主，也含有少量的IgM和IgA。在禽类，母代可以通过卵子将自身的免疫球蛋白传递给子代，对子代起到保护作用。因此，对母源抗体特别是IgG的研究，对禽类的免疫学研究具有一定的意义。 本试验分两部分进行，首先建立能对IgG定量的双抗体夹心ELISA，包括鹅IgG的提取(饱和硫酸铵法和Sephodex-G200法)，鼠抗鹅IgG抗体的制备，兔抗鹅酶标抗体的制备、参考阴性血清的制备(饱和硫酸铵法)、参考阴性卵黄的制备(水稀释法和氯仿法)。 ELISA方抗体包被时间，样品反应时间、酶标抗体反应时间等各试验条件的确定，ELISA检测方法敏感性、特异性、重复性的检验。在验证该ELISA方法成熟后，分别用参考阴性血清和参考阴性卵黄做稀释液，在此稀释液中加入不同浓度的鹅IgG，建立鹅IgG标准曲线。 然后对吉林白鹅品系鹅进行样品采集。卵黄采样按如下方法进行，孵化前采集6份卵黄样品，从4日龄开始隔日采样，每次采样6份，采集样品用无菌蒸馏水7倍稀释后冻存于-20℃冰箱中。至34日龄卵黄消失采样工作结束。血清的采集按如下方法进行，从14日龄开始，隔日采样，每次采样6份，样品采集后冻存于-20℃冰箱中。 采集所有样品后，用建立的双抗体夹心ELISA方法分别对卵黄和血清样品进行检测，检测结果利用标准曲线换算成蛋白含量。 研究发现，卵黄中的IgG含量在整个孵化期中，呈现平稳成下降趋势，卵黄的体积也相应减小，即卵黄中抗体总量的变化同时与卵黄中抗体浓度和卵黄体积相关。 卵黄中的抗体含量由孵化前的4311.196μg/ml下降至卵黄消失前的2821.363μg/ml。卵黄的体积在20日龄之前变化不是很明显，但22日龄以后，卵黄的体积急剧下降，据此推测大量抗体在该阶段为鹅胚利用。 鹅胚血清中IgG在整个孵化期中，总体成上升趋势，在24日龄以前血清中抗体含量相对较低，在26日龄后血清中抗体含量呈急剧上升趋势，在34日龄血清中的抗体含量达到高峰，36日龄后呈下降趋势。

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一 引 言

1.1双抗体夹心ELISA原理及卵黄的概述

1.2研究的目的和意义

二 正文

2.1 实验材料

2.2试验方法

三结果

3.1鹅IgG及其抗体制备结果

3.2鼠抗鹅IgG抗体的制备结果

3.3兔抗鹅酶标抗体的检测结果

3.4双抗体夹心ELISA检测方法的建立

3.5 ELISA检测步骤

3.6 ELISA检验方法的检验结果

3.7蛋白标准含量曲线检测结果(见附表)

3.8卵黄样与血清采检测结果

3.9鹅卵黄及血清中IgG的含量变化规律

四 讨论

4.1 鹅血清IgG参考阴性的选择

4.2鹅卵黄IgG参考阴性的选择

4.3鹅血清抗体吸收规律及卵黄抗体吸收规律

五 结论

5.1 ELISA方法的建立

5.2种蛋卵黄及鹅胚IgG的消长规律

参考文献

致谢

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