防风植株再生体系的建立及有效成分含量测定

摘要

防风(Saposhnikovia divaricate (Turcz.)Schisck.)原植物为伞形科(Umbelliferae)防风属(Saposhnikovia)多年生草本植物;以根入药。防风多分布在东北、华北等地。防风中的升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷;具有解热、镇痛、抗炎、抗肿瘤等药理作用。 测定种子千粒质量、净度、含水量及吸水率和种子活力;选用不同浓度的6-BA、GA3、KNO3、NAA以及不同环境培养温度对防风种子影响。实验结果表明：防风种子净度71%;千粒重(3.975±0.12)g;含水量约8.4%;吸水率最高达140.67%;即自然风干种子质量的2.4倍;防风种子生活力为77.83%。3mg/L KNO3浸泡种子;25℃恒温培养对防风种子萌发及幼苗生长具有促进作用。 本实验选用当年采收成熟且饱满干燥的防风种子;考察消毒剂的作用时间;成功诱导出防风无菌苗。选用长势良好的无菌苗;考察不同外植体、外植体龄、培养基类型、培养温度、光照条件及不同激素配比对愈伤组织诱导的影响。筛选出防风愈伤组织的最适诱导条件：41 d的防风无菌苗叶片放于MS+0.90 mg/L 6-BA+1.05 mg/L 2;4-D+0.96 mg/L KT的培养基表面;培养温度25℃;12h/d光培养。 选取上述实验所得颜色、质地较好的愈伤组织;对防风愈伤组织增殖条件进行优化;考察光照时间、基质碳源及浓度、继代周期及不同激素配比对愈伤组织增长量的影响;优化后防风愈伤组织最适的增殖条件：MS+0.56 mg/L 6-BA+0.48 mg/L 2;4-D+0.40 mg/L KT;12h/d光培养;30g/L蔗糖为碳源;继代周期30d。 将长势良好的防风愈伤组织转接到含有不同激素配比的生芽培养基上;给予不同时间光照;将诱导出的丛生芽插入不同激素配比的生根培养基上;形成完整植株。防风愈伤组织适宜生芽培养基为MS+0.6 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA;防风丛生芽诱导生根最适培养基为MS+0.4 mg/L NAA+0.1 mg/L 6-BA;12h/d光培养。 本实验采用药典 HPLC 色谱条件对防风中升麻素苷和 5-O-甲基维斯阿米醇苷进行含量测定;对防风干燥根及防风愈伤进行含量测定和比较。防风愈伤组织中升麻素苷含量是防风干燥根中的 0.89 倍;防风愈伤组织中 5-O-甲基维斯阿米醇苷含量是防风干燥根中的0.74倍。由此可见;高效稳定的防风愈伤组织培养体系;为生产防风次级代谢产物的工厂化生产奠定基础。

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