小刺猴头菌[H.caput-medusae(Bull:Fr.)Pers.]液体深层发酵浸膏低分子量活性寡糖的研究

摘要

本文以小刺猴头菌[H. caput-medusae(Bull.：Fr.)Pers.]液体深层发酵浸膏为原料，对所提取的寡糖(HPY)进行分离纯化，理化性质，稳定性，生物活性进行了初步研究，得出如下结论： 1、采用乙醇沉淀法对HPY进行预处理，粗糖得率为15.5％，依次经酸处理，反复冻融，微孔滤膜过滤后，通过Q-Sepharose FF柱层析，首先选取3个离子强度对多糖进行洗脱，结果表明，粗糖中大部分为中性无蛋白寡糖，并应用阴阳离子大孔树脂串联吸附，在最佳工艺条件下，专一性的对无蛋白寡糖进行分离，糖损失率为50.5％，因此多糖总得率为7.89％，这种小刺猴头菌液体深层发酵浸膏寡糖的制备工艺为真菌寡糖药物的开发提供了充足的原料。 2、采用苯酚-硫酸法测定小刺猴头菌液体深层发酵浸膏纯化寡糖(HPY-1)的总糖含量为97.59％，其含量测定方法稳定，重复性好，热稳定性较高。经理化方法和Superdex30p凝胶柱层析分析，得出结论HPY-1为非还原性单一组分中性寡糖，紫外吸收光谱分析结果显示HP Y-l无核酸、蛋白吸收，红外光谱分析结果显示HPY-1具有糖类的特征吸收峰，且糖苷键构型为β型。特性粘度为[η]=45。HPY-1经乙酰化，GC分析，确定其单糖组成组要是葡萄糖。 3、在抗氧化作用研究中，依次对HPY和HPY-1的还原力，超氧阴离子自由基的清除和羟基自由基清除进行了比较分析：HPY的还原能力随着浓度的增加而增强。在浓度为10mg/ml时，HPY-1的还原力达到了1.202；在相同浓度下，HPY-1的还原力要明显好于HPY。经邻苯三酚法测得超氧阴离子清除率为：HPY-1.3(33.6％)>HPY-1.2(25.9％)>HPY3(19.3％)>HPY2(15.6％)>HPY-1.1(11.5％)>HPY1(7.9％)；同样，相同浓度下，HPY-1对超氧阴离子清除力要明显好于HPY；同一样品，随着样品浓度的增加，超氧阴离子清除率也不断增加，在浓度为0.4mg/ml时，HPY-1的清除率达到了33.6％。采用清除羟基自由基实验测得羟基自由基清除率为：HPY-1.3(46.72％)>HPY3(31.52％)>HPY-1.2(29.48％)>HPY2(17.93％)>HPY-1.1(7.51％)>HPY1(3.58％)。 4、采用MTT法测定Hela和SMMC-7721肿瘤细胞进行体外IC50，结果表明，HPY作用24h对所实验肿瘤细胞具有较强的抑制增殖作用，最高抑制率均达70％以上。可以发现，HPY-1对Hela和SMMC-7721细胞的增殖有明显的抑制作用，并且呈现良好的剂量-效应关系。

目录

文摘

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第一章前言

1.1概述

1.2寡糖的研究概况

1.3猴头菌的研究概况

1.4研究的目的和意义

第二章小刺猴头菌发酵浸膏寡糖HPY-1的制备

2.1实验仪器和试剂

2.2实验方法

2.3结果与分析

2.4讨论

2.5本章小结

第三章HPY-1的部分理化性质及鉴定

3.1实验仪器和试剂

3.2实验方法

3.3结果与分析

3.4讨论

3.5本章小结

第四章HPY的体外抗氧化活性研究

4.1实验仪器和试剂

4.2试验方法

4.3结果与分析

4.4讨论

4.5本章小结

第五章HPY-1的体外抗肿瘤作用的研究

5.1实验仪器和试剂

5.2试验方法

5.3结果与分析

5.4讨论

5.5本章小结

参考文献

致谢