电击方法免疫流感病毒DNA疫苗保护效果研究

摘要

本论文由两部分组成：H5N1亚型血凝素(hemagglutinin，HA)和神经氨酸酶(neuraminidase，NA)DNA疫苗对H5N1亚型禽流感病毒的保护效果研究；以pIRES为载体构建的双表达质粒抗不同亚型流感病毒攻击的交叉保护效果研究。 (一)H5N1高致病性禽流感病毒在1997年第一次突破种属障碍传给人类，至今仍在各大洲广泛存在，影响世界经济秩序并威胁人类生命安全，对此需预先接种疫苗进行有效防范。DNA疫苗是能诱导机体产生持久的体液免疫和细胞免疫应答的一种新型疫苗，HA和NA是流感病毒感染中发挥主要作用的包膜糖蛋白，HA和NA的DNA疫苗对抗流感感染具有良好的保护效果。本文将A/Chicken/Henan/12/2004(H5N1)禽流感病毒的DNA片段HA、NA克隆入pCAGGSP7载体，构建HA和NADNA疫苗，电击法免疫6～8周龄BALB/c小鼠，免疫两次，间隔三周，加强免疫后一周，用致死剂量H5N1型病毒A/Chicken/Henan/12/2004(H5N1)的小鼠适应株感染小鼠。从小鼠存活率、肺部病毒滴度、抗体应答水平及体重丢失率等方面检测疫苗效果。实验结果表明HA和NADNA疫苗能有效保护小鼠抵御H5N1亚型禽流感病毒的攻击；为与H5N1亚型HA和NA的DNA疫苗的免疫效果进行比较，本文同样采用H1N1亚型(A/PR/8/34)HA和NA的DNA疫苗，以相同方式免疫小鼠，在致死量同型病毒攻击后，也取得了有效的保护。 (二)流感病毒极易由HA和NA变异产生新亚型而使原有疫苗失效。本文在双表达载体pIRES两个多克隆位点中分别插入H1N1和H3N2的NADNA片段，旨在开发能对多型流感病毒攻击提供广泛交叉保护的DNA疫苗。 我们以构建的双表达质粒pN1-IRES-N2，对两组6～8周龄BALB/c小鼠进行电击免疫，免疫两次，其间间隔三周，二免后一周，一组小鼠以致死量H1N1(A/PR/8/34)病毒进行滴鼻攻击，另一组以致死量H3N2(A/Guizhou-X)病毒攻击；构建出的质粒pN2-IRES-N1也以相同剂量与程序免疫小鼠，二免后同样以致死量H1N1(A/PR/8/34)和H3N2(A/Guizhou-X)病毒分组进行攻击。实验结果显示：构建出的pN1-IRES-N2疫苗能100％保护小鼠抗致死量H1N1(A/PR/8/34)病毒攻击，对H3N2(A/Guizhou-X)病毒攻击则只能提供部分保护(40％)；同样，pN2-IRES-N1疫苗能全保护小鼠抗致死量H3N2(A/Guizhou-X)病毒攻击，而对H1N1(A/PR/8/34)病毒攻击仅能提供60％的保护。

目录

文摘

英文文摘

第一章前言

第二章H5N1 HA/NA DNA疫苗电穿孔导入法免疫小鼠抗禽流感病毒保护效果研究

第三章双表达DNA疫苗的构建及抗流感病毒交叉保护效果研究

参考文献

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