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摘要
ABSTRACT
前言
1 转录激活因子AP-2基因家族
1.1 转录激活因子AP-2基因家族的结构特点
1.2 转录激活因子AP-2γ的生物学功能
1.3 AP-2蛋白家族与乳腺癌的关系
2 染色质免疫沉淀技术(ChIP)
2.1 ChIP技术的原理
2.2 在反式作用因子的靶序列的研究领域
3 受体酪氨酸激酶(Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 precursor,ErbB2)的简介
3.1 ErbB2的分布、定位与结构
3.2 erbB2与乳腺癌
3.3 erbB2信号途径与乳腺癌
4 神经-钙粘素(N-cadherin,CDH2)的简介
4.1 N-cadherin的分布、定位与结构
4.2 N-cadherin的分子生物学性能
4.3 N-cadherin与乳腺瘤
5 乙酰肝素酶(Heparanase,HPSE)的简介
5.1 HPSE基因的分布、定位与结构
5.2 HPSE的分子生物学性能
5.3 HPSE与肿瘤转移
6 免疫球蛋白超家族成员11(Immunoglobulin superfamily member 11,IGSF11)的简介
第一部分 材料与方法
1 材料
1.1 菌种和细胞株
1.2 载体和工具酶
1.3 抗体
1.4 试剂盒
1.5 其它试剂
1.6 所需溶液
1.7 siRNA干扰序列
1.8 主要仪器设备
2 实验方法
2.1 细胞培养
2.2 免疫沉淀和Western Blot检测
2.3 染色质免疫沉淀(ChIP)
2.4 AP-2γ-ChIP-PCR扩增实验
2.5 野生型和突变型pTAL-ChIP-DNA载体的构建及寡核苷酸合成
2.6 细胞转染和萤光素酶试验(Luciferase assay)
2.7 RNA抽提和相对定量RT-PCR
2.8 电泳迁移率变动分析试验(EMSA)
2.9 统计学分析
第二部分 结果分析
1 pUC19-ChIP-DNA质粒的测序结果及分析
2 AP-2γ-ChIP-PCR实验检验AP-2γ转录因子与R3-36,R4-28,R1-15片段结合的特异性
3 AP-2γ转录因子影响了R3-1,R3-36,R4-28,R1-15片段的转录活性
4 AP-2γ-ChIP-DNA片段上AP-2γ的潜在结合位点的鉴定
5 AP-2γ转录因子影响了ErbB2,CDH2,IGS11l和HPSE基因的mRNA的转录水平
6 AP-2γ调控ErbB2,CDH2,IGSF11和HPSE的蛋白表达
第三部分 讨论
参考文献
附录
致谢
湖南师范大学;