杂色云芝多糖的提取、分离及药理活性研究

摘要

杂色云芝(Trametes versicolor(L.) Lloyd)，是多孔菌科真菌彩云革盖菌的干燥子实体。多糖是杂色云芝的主要活性成分，具有丰富的生物活性。市售云芝类多糖类药品并不多见，最常用的为云芝肝泰，作为免疫调节剂用于治疗急慢性活动性肝炎。目前，关于云芝多糖抗肝癌活性及抗药物性肝损伤及其作用机理的研究较少，因此，本文对杂色云芝多糖这两方面活性开展了实验研究，并对其机制进行了探究。 分别采用水、pH=2的盐酸溶液、6%的尿素溶液、3%的三氯乙酸溶液和0.2M的氢氧化钠溶液对杂色云芝子实体多糖进行了提取，分别得到杂色云芝多糖YZ0、YZ1、YZ2、YZ3和YZ4，再采用Sevage法除去各多糖中蛋白，活性炭法脱色，最后得到纯化后的各杂色云芝多糖。对纯化后的各多糖，采用比色法测定了中性糖、蛋白及葡糖糖醛酸含量;采用柱前衍生化气相色谱法检测各多糖的单糖组成;多糖 YZ0经凝胶色谱柱分离纯化后，各级分采用 HPLC 法测定分子量分布;并对各多糖抗肿瘤活性及多糖YZ0对APAP诱导的肝损伤保护作用进行了研究。 以H22肝癌移植瘤小鼠为模型，设置空白对照组、模型组、CTX组和杂色云芝各多糖给药组，分高、低剂量组，每天给药1次，连续给药10d，比较各组抑瘤率、脏器指数、IL-6、IL-2、INF-γ、TNF-α、ALT、AST、BUN和CRE等指标，最后观察各组肿瘤组织H&E染色后的形态变化和细胞凋亡情况，并通过对杂色云芝YZ0多糖高、低剂量组小鼠肿瘤组织免疫组化检测及Western blot检测了Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9的表达，以进一步研究杂色云芝多糖的抗肿瘤机制。结果表明：杂色云芝多糖在一定程度上能够抑制肿瘤组织的生长，其中多糖YZ0高剂量组效果最好，其抑瘤率达到68.3%，高于CTX组的66.4%;且改善了免疫器官指数和血清细胞因子 IL-6、IL-2、IFN-γ、TNF-α 水平，降低了血清ALT、AST、BUN和CRE水平;同时肿瘤组织H&E染色及凋亡检测结果表明，杂色云芝多糖可促使肿瘤细胞凋亡;Western Blot及免疫组化分析得出杂色云芝多糖可调控相关凋亡蛋白的表达，从而发挥抗肿瘤作用。 以APAP诱导的肝损伤小鼠为模型，设置空白对照组、模型组和杂色云芝多糖YZ0给药组(分高、低剂量组，每天给药1次，连续给药7d)，通过ALT、AST、IL-6、TNF-α、SOD、GSH、CAT和MDA等指标的测定及H&E染色、Western Blot检测来评价杂色云芝多糖YZ0对APAP诱导肝损伤的保护作用及机理。结果表明：多糖YZ0预处理可降低由APAP造成的血清细胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α水平 的异常升高，以及血清AST、ALT水平和肝脏匀浆MDA含量的异常升高，还可增加肝脏匀浆SOD、CAT、GSH活力;H&E染色结果显示多糖YZ0可改善APAP引起的肝细胞炎性浸润;Western Blot结果表明多糖YZ0预处理可明显降低APAP诱导的JNK磷酸化水平和ERK磷酸化水平的异常升高。 简而言之，本研究显示杂色云芝多糖具有良好的抗肿瘤活性和肝保护作用。杂色云芝多糖可通过增强机体免疫力、调控炎症及诱导肿瘤细胞凋亡发挥抗肿瘤作用;还可以通过调控机体抗氧化机能、免疫和炎症通路来对抗药物性肝损伤。

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